[发明专利]血浆中花生四烯酸乙醇胺和2-花生四烯甘油含量的检测方法及先兆流产诊断试剂盒

权利要求书

1.2-花生四烯甘油(2-AG)或2-花生四烯甘油(2-AG)联合花生四烯酸乙醇胺(AEA)或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备诊断先兆流产的试剂盒。

2.一种非诊断性检测花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)含量的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)提供一样品，所述样品包括来自于孕妇外周血的血液样品；

(2)对步骤(1)中的样品进行提取前处理，得到待上机检测样品；

(3)对步骤(2)中待上机检测样品采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析，从而获得所述待分析样品中花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)含量。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述提取前处理包括步骤：

(a)向血浆加入第一萃取液和10～100ul的内源性大麻素同位素内标，均质后离心，离心后得到体积为V1的上清液1；

(b)将离心得到的上清液1经氮气吹至体积V2，后用第二萃取剂于室温萃取，然后离心取上清液2并氮气吹干，用复溶剂重新分散，得到待上机检测样品。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述检测为超高效液相色谱-串联质谱法检测。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述第二萃取剂选自下组：乙酸乙酯和异丙醇混合溶液，乙酸乙酯，二甲苯，甲苯，氯仿，甲醇和氯仿或其组合。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述乙酸乙酯和异丙醇混合溶液中乙酸乙酯和异丙醇体积比为(6.5～9.0):(1.0～3.5)。

7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的超高效液相色谱的工作条件包括：流动相A是乙酸铵水溶液，流动相B是乙酸铵甲醇水溶液，流动相采用梯度流速，初始流速为0.09-0.59ml/min，较佳地为0.32～0.46ml/min；进样量为为1.9-9.9μl，较佳地为3～8μl。

8.一种先兆流产诊断试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括：

(i)用于提取血浆中花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)的试剂；

(ii)用于制备超高效液相色谱-串联质谱法所需预处理试剂和流动相试剂；以及，

(iii)标签或说明书，所述标签或说明书注明所述试剂盒用于检测或诊断先兆流产。

9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A选自：2.4～3.8mM乙酸铵水溶液，0.1～0.5％甲酸水溶液，1～5mM甲酸铵水溶液，超纯水；所述流动相B选自：1.2～2.6mM乙酸铵甲醇水溶液，0.1～0.5％甲酸甲醇溶液，1～5mM甲酸铵甲醇溶液，纯甲醇溶液。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述的甲醇水溶液中甲醇与水的体积比为(4.9～9.9):(0.1～5.1)，较佳地为(7.5～9.5):(0.5～2.5)。