[发明专利]一种沙棘属植物根瘤内生菌分离培养方法

权利要求书

1.一种沙棘属植物根瘤内生菌分离培养方法，包括以下工艺步骤：

（1）对沙棘根瘤样品进行表面消毒：取备用的沙棘根瘤样品，依次用流动的自来水冲洗，并用毛笔刷洗掉泥沙等杂质后，用无菌水冲洗3~5次，用75%乙醇表面消毒8~10min、用1%NaClO溶液表面消毒5~7min，再用无菌水冲洗3~5次；

（2）内生菌培养：将经消毒处理的沙棘根瘤切片，分别置于不同的平板培养基上，采用不同的培养基并分别加入沙棘根浸出液，进行无菌培养；培养条件为：于25~30℃下培养 3~7d；

内生真菌采用PDA培养基，内生细菌采用牛肉膏蛋白胨培养基，内生放线菌采用高氏I号培养基；

（3）内生菌的分离纯化：待组织块边缘长出菌落后转接至新鲜的平板，通过划线纯化，然后在显微镜下观察并检测其纯度，直到获得内生菌单菌落，斜面保存备用。

2.如权利要求1所述一种沙棘属植物根瘤内生菌分离培养方法，其特征在于：培养基与沙棘根浸出液的体积比为1:15~1:20。

3.如权利要求1或2所述一种沙棘属植物根瘤内生菌分离培养方法，其特征在于：沙棘根浸出液的制备方法为：将沙棘根洗净剪碎，与蒸馏水按1:1~1:1.5的体积比混合，煮沸后文火煎煮0.5~1h，过滤，取清液，121℃灭菌储存备用。