[发明专利]一种抗肝癌细胞转移的抑制剂组合物

说明书

技术领域

本发明涉及基于RNA干扰技术和酶活性抑制技术，通过抑制乙酰肝素酶活性来阻断肝癌细胞转移的抑制剂组合物。

背景技术

恶性肿瘤细胞的典型特征是肿瘤细胞在原发组织获得增殖能力后，不断突破肿瘤微环境中细胞外基质或者基底膜对其的束缚，进而在远隔器官形成转移瘤，肿瘤的转移是导致肿瘤患者死亡的重要原因。

原发性肝癌是我国最常见且恶性程度最高的肿瘤之一，目前，手术切除仍是治疗原发性肝癌的首选方法。然而根治性切除后患者的5年复发率高、转移率高，这成为肝癌临床治疗的难题。因此，探寻肝癌细胞侵袭转移的特异性规律，并针对此寻找有效的药物干预手段将有可能为抗肝癌新药的开发以及临床肝癌的个体化治疗提供新的思路和方法。

乙酰肝素酶-1(Heparanase-1，HPA-1)是一种内切糖苷酶，能特异性降解表达在细胞外基质或基底膜中的底物硫酸乙酰肝素类蛋白聚糖(HSPG)的硫酸乙酰肝素(HS)侧链，从而发挥乙酰肝素酶-1的生理及病理学功能。目前研究发现，乙酰肝素酶-1在大多数的癌组织包括肝癌组织的表达中增强，癌组织中乙酰肝素酶-1的表达增加能够促进肿瘤组织的血管生成以及肿瘤细胞的侵袭及转移，而且表达量越高，作用越明显。研究表明，肿瘤细胞所表达的分泌性乙酰肝素酶-1更有利于肿瘤细胞穿过基底膜和细胞外基质而转移。因此，下调乙酰肝素酶-1的表达以及抑制其活性已经成为控制肝癌细胞转移的一个新的治疗方法。

目前，乙酰肝素酶-1的抑制方法主要有两种途径。一是利用RNA干扰(RNAi)技术，即使用针对乙酰肝素酶-1的特异性小干扰RNA下调乙酰肝素酶-1表达。另一种为使用肝素等乙酰肝素酶-1活性抑制剂，两种方法均能达到下调乙酰肝素酶-1活性的效果。但两者单独应用都具有各自的弊端，如单独应用RNAi技术容易产生脱靶效应，也就是大剂量使用特异性小干扰RNA在干扰特异性靶基因表达的同时，有可能抑制与特异性靶基因有一定序列相似性的基因的表达，此外，小剂量使用特异性小干扰RNA的干扰效果是否完全、彻底也是RNA干扰技术应用的一大瓶颈。而单独应用肝素时，大剂量在临床上容易产生抗凝血作用，小剂量则对乙酰肝素酶-1活性的干预效果不明显。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗肝癌细胞转移的抑制剂组合物，用以解决目前无法提供有效阻断肝癌细胞转移的抑制剂的问题。

为实现上述目的，本发明提供一种抗肝癌细胞转移的抑制剂组合物，所述抑制剂组合物至少包括肝素以及具有正义链和反义链的siRNA-1、siRNA-2作为有效成分。

所述siRNA-1的正义链的核酸序列如SEQ ID:1所示；

所述siRNA-1的反义链的核酸序列如SEQ ID:2所示。

所述siRNA-1的正义链和所述siRNA-1的反义链核酸序列互补。

所述siRNA-2的正义链的核酸序列如SEQ ID:3所示；

所述siRNA-2的反义链的核酸序列如SEQ ID:4所示。

所述siRNA-2的正义链和所述siRNA-2的反义链核酸序列互补。

所述组合物中，所述siRNA-1和siRNA-2等量组合物的浓度为10-30nmol/L，所述肝素的浓度为20-30U/mL。

所述组合物中，所述siRNA-1和siRNA-2等量组合物的浓度为15-25nmol/L，所述肝素的浓度为25-28U/mL。

所述siRNA-1是针对乙酰肝素酶-1mRNA序列的334-353区域设计的干扰序列。

所述siRNA-2是针对乙酰肝素酶-1mRNA序列的393-411区域设计的干扰序列。

本发明抗肝癌细胞转移的抑制剂组合物具有如下优点：

本发明抗肝癌细胞转移的抑制剂组合物对肝癌细胞侵袭扩散能力的抑制效果最明显，可以作为一种干预肝癌细胞转移的有效抑制剂。

附图说明

图1A为本发明的Hca-F细胞经不同浓度siRNA-1、siRNA-2分别处理后HPA-1的RT-PCR鉴定，A:RT-PCR琼脂糖凝胶电泳图谱。

图1B:为本发明的HPA-1mRNA表达的半定量分析柱状图。