[发明专利]检测AR基因突变的引物和方法在审
申请号: | 201711261967.5 | 申请日: | 2017-12-04 |
公开(公告)号: | CN108018342A | 公开(公告)日: | 2018-05-11 |
发明(设计)人: | 桑志高;吴鹏飞;王淑一 | 申请(专利权)人: | 合肥艾迪康临床检验所有限公司 |
主分类号: | C12Q1/6869 | 分类号: | C12Q1/6869;C12Q1/6886;C12N15/11 |
代理公司: | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人: | 黄素萍 |
地址: | 230088 安徽省合*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 检测 ar 基因突变 引物 方法 | ||
1.一种检测AR基因突变的引物,其特征在于,所述扩增引物的核苷酸序列包括:
AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’
AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’
所述测序引物的核苷酸序列包括:
AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’
AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’。
2.根据权利要求1所述的引物,其特征在于,所述扩增引物在如下扩增体系中使用:10μl的2×KOD Buffer,0.4μl的KOD酶,4μl的d NTP;10μM引物AR-F和10μM AR-R各0.5ul;3.6μl去离子水;1μl的cDNA模版。
3.使用一对引物检测AR基因W741L/C、H874Y、F876L和T877A位点的基因突变情况的方法,包括以下步骤:
(1)提取人全血样本中的RNA,逆转录获得cDNA;
(2)利用扩增引物进行PCR扩增步,得到扩增产物;
(3)使用酶法纯化PCR产物;
(4)利用测序引物进行Sanger测序,得到不同片段长度的测序产物;
(5)对得到的测序结果进行分析;
所述扩增引物的核苷酸序列包括:
AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’
AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’
所述测序引物的核苷酸序列包括:
AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’
AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述扩增引物在如下扩增程序下进行:94℃5min;98℃10s,58℃25s,72℃25s,共40个循环;72℃2min。
5.根据权利要求3所述的检测方法,其特征在于,测序反应条件为:95℃预变性4min;95℃变性15s,50℃退火20s,60℃延伸2min,25个循环。
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