[发明专利]一种防治松材线虫的生物农药及其制备方法

说明书

本发明涉及一种防治松材线虫的生物农药及其制备方法，以及其在防治松材线虫方面的应用。该农药的剂型为粉剂，该粉剂的活性成分为绿木霉（Trichoderma virens）T43发酵液正丁醇提取物，该粉剂是通过将发酵液过滤、离心，取上清液，加正丁醇混合萃取，弃水层，将正丁醇层蒸发浓缩得到的。

技术领域

本发明涉及一种防治松材线虫的生物农药，该农药提取于抑制松材线虫生防真菌—绿木霉(Trichoderma virens)T43发酵液中抑菌代谢产物，还涉及及其制备方法，尤其是涉及绿木霉(Trichoderma virens)T43液体发酵工艺流程和活性成分的分离提取方法，以及其在防治松材线虫方面的应用。

背景技术

松材线虫病(Bursaphelenchus xylophilus)是松树的毁灭性病害，树木患病后死亡率极高，防治难度大，能造成相当严重的经济损失和非常重大的生态灾难，在林业经济和自然景观上有着很大的威胁，在世界各国有着头号植物检疫对象之称。对于防治松材线虫，历来以化学药剂为主，而化学药剂带来的负面影响，使得生物防治的研究成为热点。真菌农药具有毒性低，选择性强，高效低残留，对环境造成的危害低等特点。国内外研究表明绿木霉对多种病害具有抑制作用。说明绿木霉T43在液体发酵过程中，可以代谢出多种抑菌活性成分。但针对绿木霉(Trichoderma virens)T43进行生物防治的研究比较多的集中于拮抗作用、抑菌成分、抑菌机理等方面，对于绿木霉杀松材线虫活性成分防治松材线虫的生防菌剂的制备方法，经检索未发现与本发明相关的报道。

绿木霉(Trichoderma virens)在Ainsworth(1973)系统中属于半知菌亚门(Deuteromycotina)，丝孢纲(Hyphomycetes)，丝孢菌目(Hyphoales)，丝孢菌科(Hyphoaceae)，木霉属(Trichoderma)。绿木霉(Trichoderma virens)T43是一株广谱高效拮抗木霉菌株，对多种林木病原菌包括樟子松枯梢病菌(Sphaeropsis sapinea)、杨树烂皮病菌(Cytospora chrysosperma)、杨树叶枯病菌(Alternaria alternata)、沙棘干缩病菌(Fusarium sporotrichoides)、苗木立枯病菌(Rhizoctonia solani、Fusariumoxysporum、Pythium debaryanum)、松烂皮病菌(Cenangium ferruginosum)均有较好的抑制效果，其发酵液及乙酸乙酯提取物对松球壳孢菌室内生长抑制率分别为92.94％和90.58％，易培养，功效高。将此菌株应用到松材线虫防治还是首次。因此有必要开发一种高效、低毒、无公害的、稳定、便于保存的防治松材线虫的绿木霉生物农药。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种防治松材线虫的生物农药及其制备方法，以及其在防治松材线虫方面的应用。

本发明的另一方面，提供了一种防治松材线虫的生物农药，其特征在于，该农药的剂型为粉剂，该粉剂的活性成分为绿木霉(Trichoderma virens)T43发酵液正丁醇提取物，该粉剂是通过将发酵液过滤、离心，取上清液，加正丁醇混合萃取，弃水层，将正丁醇层蒸发浓缩得到的。

另一方面，具体的制备工艺如下：

1.制备PDA培养基

按照改良的PDA培养基制备方法。配方：马铃薯180-220g，葡萄糖18-22g，硫酸镁1-2g，磷酸二氢钠2-4g，琼脂18-22g，水1000mL，制作1L液体。分别装于500mL的锥形瓶中，每瓶大约装250mL。将装有培养基的锥形瓶放入高压灭菌器中(118-124℃)下灭菌18-22min。

2.接种