[发明专利]检测MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66的引物、方法和试剂盒

说明书

本发明公开了检测MTHFR C677T、MTHFR A1298C和MTRR A66G碱基突变的引物，包括扩增MTHFR C677T、MTHFR A1298C和MTRR A66G位点的引物；采用Sanger测序技术，可用于快速检测叶酸代谢障碍患者体内MTHFR C677T、MTHFR A1298C和MTRR A66G位点突变情况。利用本发明完成的检测结果准确，可以辅助诊断遗传性叶酸代谢障碍情况，对早期干预、早期治疗和产前诊断有重要的参考意义。

技术领域

本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测MTHFR677、MTHFR1298 和MTRR66位点突变的引物，采用普通PCR技术，可用于快速检测叶酸代谢障碍患者体内MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66位点的突变情况。

背景技术

叶酸是维生素B复合体之一，相当于蝶酰谷氨酸，有促进骨髓中幼细胞成熟的作用。叶酸在肠道吸收后，经门静脉进入肝脏，在肝内二氢叶酸还原酶的作用下，转变为具有活性的四氢叶酸。后者是体内转移“一碳基团”的载体，是 DNA合成的主要因素，由于叶酸缺陷而导致的DNA合成或者S-腺苷甲硫氨酸 (SAM)合成缺陷会影响正常的细胞周期并导致细胞的死亡。而真核细胞本身不能够合成叶酸，体外获得充足的叶酸在机体发育的过程中于是变得尤为重要。此外叶酸对细胞的分裂生长及核酸、氨基酸、蛋白质的合成起着重要的作用。人体缺少叶酸可导致红血球的异常，未成熟细胞的增加，贫血以及白血球减少。叶酸是胎儿生长发育不可缺少的营养素。孕妇缺乏叶酸有可能导致胎儿出生时出现低体重、唇腭裂、心脏缺陷等。如果在怀孕头3个月内缺乏叶酸，可引起胎儿神经管发育缺陷，而导致畸形。有关于叶酸对于女性的健康好处广受医学界注意，除了怀孕与哺乳期的妇女应该补充，它也被发现能够用于预防大肠癌和心脏病，每天补充400mcg的叶酸受到许多医界人士的建议，美国也研拟将的每日叶酸建议用量提高到每天400mcg。经过多方研究认为MTHFR C677T(rs1801133)、MTHFR A1298C(rs1801131)以及MTRR A66G(rs1801394)，此三位点多态性与以上所述等多种疾病相关。因此，对这三个突变热点的检测就变得至关重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66位点突变的引物，采用PCR技术，可用于快速检测叶酸代谢障碍患者体内 MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66位点的突变情况。所述检测MTHFR677、 MTHFR1298和MTRR66位点突变情况的引物，包括：

扩增MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66位点的引物，其碱基序列为：

MTHFR677-F：GGGGACGATGGGGCAAGTGAT

MTHFR677-R：GGCTGTGCTGTGCTGTTGGAAGGT

MTHFR1298-F：CCAGCATCACTCACTTTGTGACCATT

MTHFR1298-R：GCCAGGGGCAATTCCTCTTCC

MTRR66-F：AGCTTGTCTACAGGGTTGCACTT

MTRR66-R：GGCTCTAACCTTATCGGATTCACTA。

进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：

检测MTHFR677、MTHFR1298和MTRR66位点的测序引物碱基序列为：

MTHFR677-F：GGGGACGATGGGGCAAGTGAT

MTHFR677-R：GGCTGTGCTGTGCTGTTGGAAGGT

MTHFR1298-F：CCAGCATCACTCACTTTGTGACCATT