[发明专利]一种采用不对称卟啉化合物测定甲硝唑含量的荧光光谱方法

权利要求书

1.一类可用于甲硝唑含量测定的荧光分析的肉桂酰氨基卟啉，其特征是具有下述通式(I)：

其中，所述R表示氢原子或卤素原子或羟基或氨基或氰基或羧基或选自C1～C15的烷基、取代的C1～C15的烷基、C1～C15的烷氧基、取代的C1～C15的烷氧基、C1～C15的烯烃基、C1～C15的炔烃基、C6～C15的芳基和C1～C15的杂环基中的一种或多种。

2.对权利要求1所述的肉桂酰氨基卟啉(I)与甲硝唑之间的相互作用采用胶束增敏荧光猝灭分析法进行研究，利用甲硝唑对卟啉化合物这一荧光探针分子的荧光猝灭作用，建立一种灵敏度高，选择性好，操作简便，可用于日常药物甲硝唑含量测定的新的荧光分析法，其特征在于步骤和条件如下：

a)组分添加的顺序

将所有组分包括：所述的肉桂酰氨基卟啉(I)，甲硝唑，微乳液，缓冲液按不同顺序添加，测定荧光猝灭程度，优选组分添加顺序为：卟啉+甲硝唑+微乳液+B-R缓冲液；

b)微乳液的选择

采用不同表面活性剂形成的不同微乳液为反应介质，优先采用阳离子型表面活性剂所组成的微乳液用于所述的肉桂酰氨基卟啉(I)与甲硝唑相互作用的研究，所述的阳离子型表面活性剂为季铵盐类，优选十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)；

c)缓冲体系的选择

采用缓冲溶液体系作为所述的肉桂酰氨基卟啉(I)与甲硝唑相互作用的介质，所用的缓冲体系包括PBS缓冲溶液，Britton-Robinson缓冲溶液，醋酸-醋酸钠缓冲溶液，KH₂PO₄-Na₂B₄O₇缓冲溶液，优选Britton-Robinson缓冲溶液；

d)共存物质的干扰实验

研究甲硝唑片剂常用的辅料，对其测量误差影响，甲硝唑片剂常用的辅料在此体系中的浓度分别为甲硝唑浓度的40倍、500倍、500倍及500倍，但其测量误差最大的仅有3.1％，相对误差数值均小于5％，可以证明这些辅料的存在并不会对甲硝唑含量测定产生影响；所用辅料包括常见辅料：淀粉、糊精、阿拉伯胶及葡萄糖；

e)标准曲线的测定

在最佳的实验条件下测定不同浓度甲硝唑溶液与肉桂酰氨基卟啉作用的荧光强度，建立甲硝唑溶液与肉桂酰氨基卟啉相互作用的标准曲线；

优选测定条件：0.3mL的1×10-5mol/L的肉桂酰氨基卟啉溶液、一系列不同体积的10μg/mL甲硝唑溶液、0.5mL的CTAB微乳液和1.5mL的pH 4.10的B-R缓冲溶液，用水定容并摇匀，室温下静置15min，最佳条件下测量其荧光强度；

g)检测限的测定

根据公式：LOD＝3σ/K，σ是空白实验测定超过10次的标准偏差，K为标准曲线斜率。在最佳实验条件下测定体系的荧光强度；

优选测定条件：在10mL容量瓶中分别按顺序加入以下物质：0.3mL的1×10-5mol/L的肉桂酰氨基卟啉溶液、0.5mL的CTAB微乳液和1.5mL的pH 4.10的B-R缓冲溶液，用水定容，并摇匀，室温静置15min。相同条件下重复11次，测量其荧光强度。