[发明专利]一种MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒及扩增方法在审
| 申请号： | 201711266570.5 | 申请日： | 2017-12-05 |
| 公开（公告）号： | CN109468369A | 公开（公告）日： | 2019-03-15 |
| 发明（设计）人： | 不公告发明人 | 申请（专利权）人： | 湘潭智联技术转移促进有限责任公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 410100 湖南省湘潭*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 扩增 试剂盒 多重PCR扩增 引物特异性 扩增产物 扩增引物 灵活选择 一盒多用 多重PCR 缓冲液 错配 位点 引物 检测 | ||
1.一种MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括MTHFR基因SNP位点的扩增引物、Taq酶、dNTPs和缓冲液，其中MTHFR基因的SNP位点选自：C667T、A1298C、MTRR和/或A66G。
2.根据权利要求1所述的MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的SNP位点为C667T和A1298C，其中C667T的序列如序列表SEQ ID NO：1所示，A1298C的序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
3.根据权利要求2所述的MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括用于扩增SEQ ID NO：1所示片段的上下游引物序列和用于扩增SEQ ID NO：2所示片段的上下游引物序列。
4.根据权利要求3所述的MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒，其特征在于：用于扩增SEQID NO：1所示片段的上下游引物序列如序列表SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示，用于扩增SEQ ID NO：2所示片段的上下游引物序列如序列表SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示。
5.根据权利要求1所述的MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂盒还包括全血样品PCR缓冲液，所述缓冲液含有100mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，pH9.3～9.5。
6.一种采用如权利要求1～5任一项所述的MTHFR基因的多重PCR扩增试剂盒的扩增方法，其特征在于，所述扩增方法采用的扩增体系为25μL的PCR体系，具体为：
10×PCR buffer 2μL；
Mg2+(25mmol/L)1μL；
dNTPs(25mmol/L)0.6μL；
Taq酶(5U/μL)0.3μL；
C667T和A1298C模板各2μL；
C667T和A1298C上下游引物(10μmol/L)各1μL；
无菌双蒸水补齐至25μL。
7.根据权利要求6所述的MTHFR基因的多重PCR扩增方法，其特征在于，所述扩增方法的反应条件为：94℃预变性5.5min；然后94℃变性30s，58℃退火45s，72℃延伸50s，36个循环后，再次72℃延伸5min。
8.根据权利要求6所述的MTHFR基因的多重PCR扩增方法，其特征在于：用于PCR扩增的DNA样本为提取后的人全血样品。
9.根据权利要求6所述的MTHFR基因的多重PCR扩增方法，其特征在于：人全血样品进行PCR扩增时，PCR扩增体系中缓冲液采用全血样品PCR缓冲液。
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