[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的Myo检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供一种基于双分子荧光互补技术的Myo检测试剂盒、制备及使用方法。所述试剂盒包括：抗Myo抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗Myo抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的Myo诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗Myo抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗Myo抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有特异性好、操作方便、检测快速、线性范围宽、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，其应用于急性心肌梗死的监测，可以提高急性心肌梗死诊断的准确率，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内Myo的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)是世界上发病率和死亡率较高的疾病之一。据最近美国心脏病协会数据显示，2003年美国有720万AMI患者。但同时AMI又是高误诊率的疾病之一，一些确实患有AMI的患者没有得到恰当的处理，导致较高的死亡率；而另一些非AMI患者又接受了不必要的治疗，引起不必要的花费。世界卫生组织推荐：典型的胸痛、心电图改变和心肌酶异常三项指标中有两项符合，即可诊断AMI。但许多AMI患者早期没有典型的临床症状和心电图的异常改变，因此心肌损伤标志物的检测就显得尤为重要。近年来心肌标志物在临床中的应用得到了越来越广泛的重视，其发展也相当迅速，在临床中出现了很多心肌标志物。

肌红蛋白(Myoglobin，Myo)是一种氧结合血红素蛋白，主要分布于心肌和骨骼肌组织。 1960年由Kendrew用X线衍射法阐明，这是世界上第一个被描述的蛋白质三级结构。Myo 由一条珠蛋白多肽链和一个血红素辅基组成，能可逆的与氧结合，有储存运输氧的能力，正常人血清中Myo含量非常少，AMI期间快速释放，症状发作后1h血中即见升高，2～4h内达正常上限10倍左右，5～10h达高峰，约30h回到基线，与CK-MB比较，出现时间更早，而恢复则较慢，在急性心肌梗死早期诊断中具有重要价值。研究表明Myo对AMI诊断的敏感性和特异性分别为100％、86.7％，Myo阴性预期值最高(100％)，虽然Myo心肌特异性不高，但由于敏感性高，Myo阴性特别有助于排除AMI的诊断。由于Myo的血中半衰期短，所以又有助于观察AMI病程中有无再梗死发生以及梗死有无扩。

常用的Myo检测方法有金标定性试验、荧光免疫法、联免疫吸附试验(ELISA)和磁微粒化学发光法(CMIA)。金标定性实验快速，但该方法灵敏度低、无法动态监测Myo含量的变化。荧光免疫法操作复杂，对操作环境和操作人员有较高的要求。ELISA法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目，并且反应时间较长。CMIA法是从ELISA法改进而来，与ELISA法相比具有操作简单，检测速度快等特点，但是CMIA法是非均相反应，操作过程需要清洗，这降低了检测的可重复性。

为解决上述问题，如果能利用Myo的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发出一种针对心肌梗死疾病诊断的Myo快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作方便、灵敏度高、免清洗、精密度高等优点；将其应用于急性心肌梗死的监测，可以提高急性心肌梗死诊断的准确率，则会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测Myo的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术Myo检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗Myo抗体偶联荧光蛋白N端片段；

2)抗Myo抗体偶联荧光蛋白C端片段；

在上述技术方案中，所述抗Myo抗体为针对Myo不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。