[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的Lp-PLA2检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的Lp‑PLA2检测试剂盒、制备及使用方法。所述试剂盒包括：抗Lp‑PLA2抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗Lp‑PLA2抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的Lp‑PLA2诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗Lp‑PLA2抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗Lp‑PLA2抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、线性范围宽、特异性好、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，可预测动脉粥样硬化的发生，对预防冠心病突发事件具有相当重要的意义，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内Lp-PLA2的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)，又称血小板活化因子乙酰水解酶(PAF-AH)，分子量为45.4kD。Lp-PLA2主要由成熟的巨噬细胞和淋巴细胞合成和分泌，并受炎性介质的调节，人循环中的Lp-PLA2以与脂蛋白颗粒结合的形式存在，其中2/3与LDL结合，1/3与HDL、VLDL结合。

Lp-PLA2是近年来引起广泛关注与动脉粥样硬化(AS)密切相关的新炎症标记物。Lp-PLA2的检测能直接准确的反映血管内炎症的程度，并且可作为一个动态指标。Lp-PLA2是独立的心脑血管疾病风险预测指标，不受其他生物指标的影响，也为炎症、动脉粥样硬化与心脑血管疾病之间的联系提供了新的佐证。Lp-PLA2水平与心脑血管疾病呈显著线性相关，通过检测血液中的Lp-PLA2，可以有效地了解动脉粥样硬化斑块的炎症程度及其稳定性。

目前检测Lp-PLA2的方法主要有酶联免疫吸附试验，免疫层析法和化学发光免疫分析法等，均存在检测灵敏度较低、试剂不稳定、重复性较差，难以进行定量的缺点。

为解决上述问题，利用双分子荧光互补技术，以Lp-PLA2的抗体构建技术平台，研发出一种简便、直观、灵敏的Lp-PLA2快速检测试剂。将其应用于动脉粥样硬化疾病风险预测，可提高预警冠心病发生的准确率，具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测Lp-PLA2的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术Lp-PLA2检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗Lp-PLA2抗体偶联荧光蛋白N端片段；

2)抗Lp-PLA2抗体偶联荧光蛋白C端片段；

在上述技术方案中，所述抗Lp-PLA2抗体为针对Lp-PLA2不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。

在上述方案中，所述抗Lp-PLA2抗体偶联荧光蛋白N端片段的步骤中，荧光蛋白N端片段与抗Lp-PLA2抗体的质量比为1∶1-10。

在上述方案中，所述抗Lp-PLA2抗体偶联荧光蛋白C端片段的步骤中，荧光蛋白C端片段与抗Lp-PLA2抗体的质量比为1∶1-10。

根据以上任一技术方案所述所制备的基于双分子荧光互补技术的Lp-PLA2检测试剂盒。其主要组成包括：

1)抗Lp-PLA2抗体偶联的荧光蛋白N端片段；

2)抗Lp-PLA2抗体偶联的荧光蛋白C端片段。

以上任一技术方案所述的试剂盒的使用方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)在试剂盒的反应孔中加入样品、抗Lp-PLA2抗体偶联的荧光蛋白N端片段和抗Lp-PLA2抗体偶联的荧光蛋白C端片段，混合反应5-60min；