[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的BNP检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的BNP诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗BNP抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗BNP抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的BNP诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗BNP抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗BNP抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有操作简单、免清洗、精密度好、准确度高等优点，便于临床检测使用，其应用于心衰的监测，可以提高心衰疾病诊断的准确率，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内BNP的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide，BNP)又称B型利钠肽(B-type NatriureticPeptide)、脑利钠肽，是继心钠肽(ANP)后利钠肽系统的又一成员，主要由心脏分泌的利尿钠肽家族的一员，由32个氨基酸残基组成的多肽。由于它首先是由日本学者Sudoh等于1988年从猪脑分离出来因而得名。能调节血压和血容量的自稳平衡，并有利尿作用，实际上它主要来源于心室。BNP具有重要的病理生理学意义，它可以促进排钠、排尿，具较强的舒张血管作用，可对抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的缩血管作用，同ANP一样是人体抵御容量负荷过重及高血压的一个主要内分泌系统。心功能障碍能够极大地激活利钠肽系统，心室负荷增加导致BNP释放。

BNP主要由心室肌细胞合成和分泌，心室负荷和室壁张力的改变是刺激BNP分泌的主要条件。BNP的清除有两条途径：一是由利尿钠肽家族的C型受体介导，内吞入胞内后由溶酶体降解；二是经中性内肽酶(NEP)降解。利钠肽系统共有A、B、C三型受体，均为跨膜受体，BNP的清除主要通过两条途径：第一：通过C受体介导将BNP内吞入胞内，再由溶酶体酶降解；第二：由中性肽链内切酶对BNP降解，此酶在肺脏及肾脏中浓度较高。ANP较BNP 对中性肽链内切酶的亲和力要大的多，但第二种途径仍为BNP代谢的主要途径，再由于C受体对ANP的亲和力亦高于BNP，这样造成BNP的生物半衰期(20分钟)长于ANP(约3 分钟)。

目前关于BNP的临床研究主要集中在左室功能障碍(LVD)方面，这里的左室功能指收缩功能。无论正常人还是LVD患者，BNP均主要由左室心肌细胞合成分泌，进入小静脉回流至室间隔静脉通过冠状窦进入循环，其分泌主要由左室壁张力进行调节，LVD的严重程度与其分泌正相关，外周血BNP水平可反映心室分泌率及LVD程度。

Selvais等认为BNP在诊断CHF及其严重度时优于ANP，他们将正常人、具有正常左室射血分数(LVEF)的冠心病患者、不同程度CHF患者的ANP、BNP浓度进行比较，发现重度心衰级BNP浓度明显高于轻度心衰浓度，BNP区别CHF与正常人及LVEF正常的冠心病患者的能力优于ANP，而且BNP浓度与LVEF的相关性优于ANP，在判定CHF程度时又强于LVEF，认为BNP可用于对门诊心血管病人进行诊断。

常用的BNP检测方法主要有磁微粒化学发光法。该法提高了检测的灵敏度和准确度，但都属于非均相反应，操作过程需要清洗，降低了试剂的精密度。

为解决上述问题，如果能利用BNP的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发出一种针对心衰诊断的BNP快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作快速、灵敏度高、检测快速、精密度高等优点；将其应用于心衰的监测，可以提高心衰疾病诊断的准确率，则就会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测BNP的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术BNP检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗BNP抗体偶联荧光蛋白N端片段；