[发明专利]一种基于双分子荧光互补技术的NT-proBNP检测试剂盒、制备及使用方法

说明书

本发明提供了一种基于双分子荧光互补技术的NT‑proBNP诊断试剂盒。所述试剂盒包括：抗NT‑proBNP抗体偶联的荧光蛋白N端片段、抗NT‑proBNP抗体偶联的荧光蛋白C端片段；本发明还公开了所述一种基于双分子荧光互补技术的NT‑proBNP诊断试剂盒的制备方法，该方法包括：抗NT‑proBNP抗体偶联的荧光蛋白N端片段的制备、抗NT‑proBNP抗体偶联的荧光蛋白C端片段的制备；最后还公开了该试剂盒的使用方法；本发明试剂盒具有特异性好、操作方便、检测快速、线性范围宽、免清洗、准确度高等优点，便于临床检测使用，其应用于心衰疾病的监测，可以提高心衰疾病诊断的准确率，具有极大的市场价值。

技术领域

本发明涉及一种双分子荧光互补技术用于体外免疫诊断检测人体内NT-proBNP的含量，属于疾病诊断检测领域。

背景技术

1988年，由日本学者Tetsuji Sudoh等首次从猪脑内分离得到一种具有强力的利钠、利尿、扩血管和降压作用的多肽，命名为脑钠肽或称钠尿肽(BrainNatriureticPeptide，BNP)，BNP 主要存在于心室隔膜颗粒中，当心室的容积扩张和压力负荷增加时，其分泌量增多。 NT-proBNP与BNP同属于利钠肽家族，两者的生物学来源相同，但生物学效应和临床意义不完全相同。心室肌细胞压力负荷增加时，合成134个氨基酸残基的前脑钠肽原，然后迅速剪切掉含有26个氨基酸残基的信号肽，形成含108个氨基酸的BNP前体(proBNP)，随后在内切酶的作用下裂解成含有32个氨基酸、有活性的B型利钠肽(BNP)和含有76个氨基酸、无生物活性的N末端脑钠肽原(NT-proBNP)。

心室容量负荷、室壁压力增加、心肌细胞损伤等因素是导致NT-proBNP代偿性分泌增加的主要原因。当心肌损伤或心功能不齐时，其循环中NT-proBNP的分泌代偿性增加、参与扩张血管、维持血压动态平衡、促进尿钠排泄和利尿、拮抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统等调节作用。在维持心脏代偿状态、延缓疾病进程方面起重要作用，且NT-proBNP水平的增加与心功能损伤的程度成正比。因此，NT-proBNP能反映心力衰竭的程度。近几年的研究报道： BNP或NT-proBNP检测可以有效评价心衰患者的预后，是心衰患者出院后死亡或心血管事件再住院的强有力预测指标一。NT-proBNP较BNP有以下特点：(1)半衰期较长(120min)；(2)体外稳定性强；(3)在心力衰竭患者中的浓度高于BNP。鉴于这些特点，它便于检测，更适合应用于临床。

常用的NT-proBNP检测方法有金标定性试验、荧光免疫法、联免疫吸附试验(ELISA) 和磁微粒化学发光法(CMIA)。金标定性实验快速，但该方法灵敏度低、无法动态监测 NT-proBNP含量的变化。荧光免疫法操作复杂，对操作环境和操作人员有较高的要求。ELISA 法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目，并且反应时间较长。CMIA法是从ELISA法改进而来，与ELISA法相比具有操作简单，检测速度快等特点，但是CMIA法是非均相反应，操作过程需要清洗，这降低了检测的可重复性。

为解决上述问题，如果能利用NT-proBNP的抗体，以双分子荧光互补技术为平台，研发出一种针对心衰疾病诊断的NT-proBNP快速检测试剂。使其与现有检测试剂相比，具有操作方便、灵敏度高、免清洗、精密度高等优点；将其应用于心衰疾病的监测，可以提高心衰疾病诊断的准确率，则会受到市场的广泛欢迎和具有极大的市场价值。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本发明提供一种可用于定量检测NT-proBNP的检测试剂盒、其制备及使用方法。

本发明通过以下技术方案实现：

一种制备基于双分子荧光互补技术NT-proBNP检测试剂盒的方法，包括如下步骤：

1)抗NT-proBNP抗体偶联荧光蛋白N端片段；

2)抗NT-proBNP抗体偶联荧光蛋白C端片段；