[发明专利]软化类芽孢杆菌及秸秆腐熟剂

权利要求书

1.软化类芽孢杆菌R-807，保藏于2017年8月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.14564。

2.软化类芽孢杆菌R-807基因，序列如：SEQ ID No.1所示。

3.一种秸秆腐熟剂，其特征在于：包括权利要求1所述的软化类芽孢杆菌R-807或具有权利要求2所述基因的软化类芽孢杆菌，以及枯草芽胞杆菌；腐熟剂中总有效活菌数为0.5×10⁸～2×10⁸个/g，总有效活菌数中软化类芽孢杆菌有效活菌数占65%～70%。

4.一种如权利要求3所述的秸秆腐熟剂的制备方法，其步骤为：

（1）菌种活化：将软化类芽孢杆菌、枯草芽胞杆菌分别接种于各自的斜面培养基培养，其中软化类芽孢杆菌在35～37℃、pH7.0～7.2的条件下培养23～24h，枯草芽胞杆菌在28～30℃、pH7.0～7.2的条件下培养23～24h；

（2）摇瓶培养：将步骤（1）中活化的软化类芽孢杆菌和枯草芽胞杆菌分别接种于各自的液体培养基中，摇床振荡培养至各菌种培养液中菌种有效活菌数均为10⁸～2×10⁸个/ml；

（3）种子罐发酵：将步骤（2）中各菌种培养液按5%接种量分别接种于各自的种子罐中，培养至各菌种培养液中菌种有效活菌数均为10⁸～2×10⁸个/ml；

（4）发酵罐发酵：将步骤（3）中各菌种培养液按5%接种量分别接种于各自的发酵罐中，培养至各菌种发酵培养液中菌种有效活菌数分别为10⁸～2×10⁸个/ml，得软化类芽孢杆菌菌液和枯草芽胞杆菌菌液；

（5）将步骤（4）中软化类芽孢杆菌菌液、枯草芽胞杆菌菌液按1.8～2.4:1的体积比混合，得混合菌液，将混合菌液与麦麸或碎秸秆按3:6～8的质量比混和搅拌，自然风干，得总有效活菌数为0.5×10⁸～2×10⁸个/g的混合物，将混合物晾干、粉碎、制剂，得秸秆腐熟剂。

5.权利要求4所述的秸秆腐熟剂的制备方法，其特征在于：步骤（1）中软化类芽孢杆菌的斜面培养基配方为：蛋白胨10g，酵母膏2g，牛肉膏5g，氯化钠5g,琼脂20g，补水至1000ml，pH7.2，在121℃下高温灭菌30min；枯草芽胞杆菌的斜面培养基配方为：蛋白胨10g，酵母膏2g，牛肉膏5g，氯化钠5g,琼脂20g，补水至1000ml，pH7.2，在121℃下高温灭菌30min。

6.权利要求4所述的秸秆腐熟剂的制备方法，其特征在于：步骤（2）中软化类芽孢杆菌的液体培养基配方为：蛋白胨10g，酵母膏2g，牛肉膏5g，氯化钠5g,补水至1000ml，pH7.2，在121℃下高温灭菌30min；枯草芽胞杆菌的液体培养基配方为：蛋白胨10g，酵母膏2g，牛肉膏5g，氯化钠5g，补水至1000ml，pH7.2，在115℃下高温灭菌30min。

7.权利要求4所述的秸秆腐熟剂的制备方法，其特征在于：步骤（2）中 软化类芽孢杆菌是在30～35℃、170～190rmp条件下摇床振荡培养23～24h，枯草芽胞杆菌是在30～35℃、140～160rmp条件下摇床振荡培养23～24h。

8.权利要求4所述的秸秆腐熟剂的制备方法，其特征在于：步骤（3）中 软化类芽孢杆菌的种子罐培养基、以及步骤（4）中软化类芽孢杆菌的发酵罐培养基均与步骤（2） 中软化类芽孢杆菌的液体培养基配方相同；

所述步骤（3）中枯草芽胞杆菌的种子罐培养基、以及步骤（4）中枯草芽胞杆菌的发酵罐培养基均与步骤（2）中枯草芽胞杆菌的液体培养基配方相同。