[发明专利]一种利用松萝检测放射性气体氡对植物DNA损伤的评价方法

权利要求书

1.一种利用松萝检测放射性气体氡对植物DNA损伤的评价方法，其特征在于，将松萝置于氡室中，置氡完成后提取细胞核，再进行单细胞凝胶电泳实验，采用CASP系统，测量DNA迁移的参数，评价DNA的损伤程度，所述提取细胞核的具体步骤为：

①预处理：去掉松萝的根及茎叶表面鳞片,用透明胶带粘附松萝叶片的上表面和下表面5-6次，去除其叶表鳞片；

②研磨：松萝茎、叶用双蒸水冲洗、放入预冷的研钵中，快速研磨至碎，并匀浆；

③去杂质：用预冷的解剖针挑取匀浆中的杂质出来，再用提取液提取；

④提取分离：加入2％纤维素酶和果胶酶混合液，混匀后于4℃静置2h，梯度离心收获；

⑤洗涤备用：用磷酸缓冲液重复洗涤细胞2次，将细胞悬于磷酸缓冲液中，置4℃冰箱，备用;

所述单细胞凝胶电泳实验包括以下步骤：

①铺胶：0.75％琼脂糖凝胶煮沸后取100μl迅速均匀铺于微电泳槽内，置于4℃冰箱1min使凝胶固化，取制好的细胞悬液25μl与75μl 0.75％低熔点琼脂糖凝胶混匀后均匀铺于第一层凝胶上面，置于4℃冰箱固化1min；

②裂解：将微电泳槽置于新鲜配制的碱性裂解液中，4℃冰箱中裂解2h，所述碱性裂解液含有2.5mol·L-1NaCl、0.1mol·L-1EDTA、10mol·L-1Tris-HCl、1％Na-lauroylsarcosine，其pH值为10；

③电泳：裂解后取出微电泳槽，用双蒸水漂洗去掉多余的盐分，置于提前加入4℃碱性电泳液的水平电泳仪中静置20min，然后在20V，200mA电泳条件下电泳20min；

④染色和观察：2μg/ml溴化乙锭染色，双蒸水漂洗，去掉多余染液，先在荧光显微镜低倍镜下观察彗星细胞，然后在高倍镜下，用图像采集系统随机抓取彗星细胞图像。

2.根据权利要求1所述的评价方法，其特征在于，抓取的彗星细胞图像采用CASP系统自动分析，测量DNA迁移的参数，评价DNA的损伤程度。

3.根据权利要求2所述的评价方法，其特征在于，表征DNA的损伤程度的参数包括拖尾。