[发明专利]EB病毒miR-BART10-5p抑制剂的应用

说明书

本发明公开了EB病毒miR‑BART10‑5p抑制剂的应用。本发明利用微管形成实验和鸡胚绒毛尿囊膜实验分析发现，在鼻咽癌细胞中呈高度表达的EB病毒miR‑BART10‑5p能明显促进鼻咽癌血管新生。本发明的EB病毒miR‑BART10‑5p抑制剂是以EB病毒miR‑BART10‑5p的反义寡核苷酸为基础，经过系列修饰获得的，通过微管形成实验、鸡胚绒毛尿囊膜实验及基质胶栓实验，证实了EB病毒miR‑BART10‑5p抑制剂能够明显抑制鼻咽癌新生血管的生成的作用，具有治疗鼻咽癌效果，进一步的，还可以应用于防治鼻咽癌的复发和转移。

技术领域

本发明属于肿瘤分子生物学领域，更具体地，涉及EB病毒miR-BART10-5p抑制剂的应用。

背景技术

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是指发生于鼻咽粘膜的恶性肿瘤，多发于中年人，偶见于青少年，恶性程度高，是头颈部肿瘤中复发率和转移率最高的疾病，早期即可出现颈部淋巴结转移且转移率高达80％，常高发于中国的华南地区和东南亚等地，具有明显地域性。鼻咽癌患者治愈后5年内仍有20～30％患者出现鼻咽癌的复发和转移，是临床上导致死亡的主要因素之一，目前临床治疗鼻咽癌的主要手段是手术、放疗和化疗，尽管当前治疗水平有了很大的提高，但鼻咽癌5年生存率仍然只有50％左右，因此亟待开发更多的治疗方法，能够辅助放化疗进一步提高鼻咽癌患者的生存率。

EB病毒(Epstein Barr virus,EBV)是一种γ疱疹病毒，几乎所有的未分化和低分化鼻咽癌都与EB病毒潜伏性感染有关。近来研究发现EB病毒编码的miRNA可参与调控EB病毒编码的基因和人宿主基因的表达，例如，EBV-miR-BART2能与编码病毒DNA聚合酶的基因BALF5的3’UTR完全互补。在裂解感染期病毒大量复制时，miR-BART2表达水平降低，对BALF5基因的分解作用减弱，有利于病毒复制循环；随着miR-BART2选择压力变化，BALF5表达降低，EBV感染细胞释放的病毒颗粒不断减少，感染进入潜伏状态(Nucleic Acids Res 310:1035-48,2009)。EBV-miR-BHRF1-3与细胞IFN诱导的T细胞趋化因子CXCL-11/I-TAC的表达水平相关，推测CXCL-11/I-TAC是miR-BHRF1-3作用靶点，EB病毒可以此作为调节方式来干扰宿主的免疫监视和免疫清除作用(Cancer Res 68:1436-42,2008)。EBV-miR-BART5能通过抑制宿主的凋亡前蛋白PUMAHl，上调P53的表达，如果从EBV感染的细胞中去除miR-BART5，将促进PUMA介导的凋亡作用，提示EBV能够抑制凋亡的发生，从而保护其感染的上皮细胞(J Exp Med 205:2551-60,2008；J Biol Chem 285:33358-100,2010)。miR-BART6-5p能抑制EBNA2病毒癌基因的表达，而这种癌基因的表达在I型和II型潜伏状态(免疫低反应)向III型潜伏状态(免疫高反应)转化的过程中是不可缺少的，表明miR-BART6在EBV的感染和潜伏中发挥重要的调节作用(J Biol Chem 285:33358-100,2010)。由此可见，EB病毒miRNA一方面可作用于病毒本身的靶基因，促进病毒的感染和潜伏，另一方面也可以作用于宿主的靶基因,促进病毒逃避宿主细胞的免疫反应，并抑制宿主细胞的凋亡。

然而，有关EB病毒编码的miR-BART10的作用及机制的研究较少，其中CN105154446A和CN105154586A共同公开了EB病毒编码的microRNA BART10及其反义寡核苷酸的应用方法，研究证实鼻咽癌组织中EBV-miR-BART10的表达水平与鼻咽癌患者的淋巴结转移及远处转移呈正相关关系；我们对此专利的序列比对，发现其涉及的实际是EBV-miR-BART10-3p。还有研究指出，EBV-miR-BART10-3p可通过靶向BTRC基因能够促进鼻咽癌EMT的发生进而促进鼻咽癌的转移(Oncotarget 39:41766-41782)。然而，迄今为止，有关EB病毒miR-BART10与鼻咽癌血管生成的关系未见任何报道。