[发明专利]以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质

说明书

本案涉及一种以4‑氨基吡咯并[3,2‑D]嘧啶为功能配基的层析介质，其特征在于，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，配基为经3‑氯苯基环氧乙烷活化后偶联的4‑氨基吡咯并[3,2‑D]嘧啶。本发明所研制的新型层析介质，以4‑氨基吡咯并[3,2‑D]嘧啶为功能配基，具有显著的疏水性电荷诱导层析分离特点，对抗体具有很高的吸附能力，可以用于抗体的规模化制备。

技术领域

本发明涉及一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。

背景技术

免疫球蛋白(immunoglobulin，Ig)即抗体(antibody，Ab)，是血液和组织液中的一类糖蛋白，是由B细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞所产生，是体液免疫的重要效应分子。

抗体的制备技术多种多样，但无论采用何种技术制备的抗体，都需要后期采用不同的分离纯化手段，获得符合要求的抗体产品，抗体的分离纯化应该遵循在满足要求的情况下尽可能减少纯化步骤，提高每一步分离效率，从而提高产率，节约成本。抗体产品往往纯度要求较高，同时还必须保持生物活性，因此传统的分离过程往往难以满足要求。蛋白A或蛋白G亲和层析介质能够特异性结合抗体，但蛋白类亲和配基易被料液中蛋白酶降解脱落，污染产品，且重复使用次数低，介质价格昂贵，操作成本极高，限制了其大规模应用。而传统的离子交换层析和疏水相互作用层析等方法虽然能够结合抗体，但是特异性和选择性较差，分离步骤多，纯化效果有限。因此，开发具有抗体选择性的非蛋白类配基成为研究热点。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本案提供一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质。

为实现上述目的，本案通过以下技术方案实现：

一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，包括层析基质和配基，所述的层析基质为带有羟基的亲水性多孔微球，配基为经3-氯苯基环氧乙烷活化后偶联的4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶。

优选的是，所述的以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，所述的层析基质为羟基化甲基丙烯酸亲水聚合物微球为基质。

优选的是，所述的以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质，其中，所述的层析介质的配基密度为30-100μmol/ml。

一种以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的层析介质的制备方法，其其中，包括如下步骤：

1)将层析基质抽干后，加入0.1-0.5倍层析基质质量的30％(v/v)二甲基亚砜、0.5-1.0倍层析基质质量的3-氯苯基环氧乙烷和0.2-0.6倍层析基质质量的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化10-40小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；

2)将活化层析基质和0.1-0.4倍层析基质质量的6-氨基乙酸混合进行反应，30℃下200rpm摇床中反应3-10小时，抽滤，用去离子水洗涤得到氨基活化的基质；

3)将氨基活化的基质和0.3-0.6倍层析基质质量的4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶以及0.5-1M碳酸钠缓冲液混合，碳酸钠缓冲液的pH为10-12，30℃下200rpm摇床中反应10-30小时，得到4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质；

4)将4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到含有1-10倍层析基质质量的三乙胺中，30℃下200rpm摇床中反应1-5小时，去离子水洗涤，得到以4-氨基吡咯并[3,2-D]嘧啶为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。

本发明的有益效果是：