[发明专利]一种薄层色谱联合高效液相色谱检测动物饲料中甲砜霉素含量的方法

说明书

本发明公开了一种薄层色谱联合高效液相色谱检测动物饲料中甲砜霉素含量的方法，属于食品安全风险监测领域。本发明方法包括如下步骤：动物饲料经乙酸乙酯提取，乙睛饱和正己烷脱脂，以体积比二氯甲烷:丙酮:氨水（25%‑28%）等于（3‑5）:（5‑7）:（0.05‑0.25）的混合液作为展开液采用薄层色谱分离样品，再采用高效液相色谱进行检测。本发明显著提高了对动物饲料中其他物质的抗干扰能力，同时降低了检测成本，减少了有机溶剂的用量，定量分析结果可靠，适用于基层检测单位对饲料中的甲砜霉素进行日常监控。

技术领域

本发明涉及食品安全风险监测领域，具体涉及一种薄层色谱联合高效液相色谱检测动物饲料中甲砜霉素含量的方法。

背景技术

甲砜霉素为酰胺醇类抗菌药物。与氯霉素相比，甲砜霉素具有抗菌谱广、抗菌效果好、安全性高等优点，因而被当做氯霉素的替代品，广泛用于畜禽呼吸道疾病的治疗。混饲给药是甲砜霉素在兽医临床上常见用法。然而在实际生产中，在饲料中过量添加甲砜霉素的情况时有发生。毒理学研究表明，甲砜霉素对造血液系统具有明显的毒性。过量添加甲砜霉素可能导致其残留于动物源性食品中，危害消费者健康和养殖业的可持续发展。为防止甲砜霉素的滥用，建立可靠且适合基层检测机构的定量分析方法很有必要。

采用酶联免疫分析技术、高效液相色谱和液相色谱-质谱联用技术检测动物饲料中甲砜霉素的定量分析方法已有文献报道。其中，高效液相色谱法具有检测结果可靠和检测成本低的优点，尤其适合基层检测单位。尽管如此，现有的高效液相色谱法缺乏有效的样品净化步骤，且样品前处理过程过于繁琐，有必要进行改良。例如《光谱实验室》2006年公开的《饲料中氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素含量的HPLC测定方法》和《饲料研究》2010年公开的《高效液相色谱法测定饲料中甲砜霉素含量》，在样品前处理环节均采用乙酸乙酯、水、正己烷反复萃取饲料中的甲砜霉素，样品前处理过于繁琐，且上述液-液萃取方法无法有效去除饲料中共存的氨基酸、色素等杂质，可能干扰随后的色谱分析。

薄层色谱是一种经典的样品分离技术。与食品安全分析中常用的固相萃取技术相比，薄层色谱具有分离效果好，成本低廉，绿色环保的优点，非常适合用于生物样品和动物饲料等复杂基质中痕量化合物的分离纯化。李春香在《新型分离技术和高效液相色谱联合测定食品中苏丹红新方法的研究》一文中采用了薄层色谱净化复杂生物样品基质；吴文达等也将薄层色谱和高效液相色谱技术联合，用于检测饲料中玉米赤霉烯酮。尽管如此，将薄层色谱用于动物饲料中甲砜霉素的分析，这在国内外尚无文献报道。

薄层展开条件是薄层色谱分析的关键技术。薄层展开条件取决于目标化合物自身的理化性质和样品基质的特点。药物制剂中甲砜霉素的薄层分析已有文献报道。如杨永嘉在《薄层色谱法鉴别氟苯尼考和甲砜霉素》一文中采用三氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水(15:6:15:1)为展开剂。由于动物饲料组成远比原料药和药物制剂复杂，该展开条件并不一定能将饲料中内源性干扰物质和甲砜霉素分离开。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺点与不足，提供一种可靠、简便、快速的薄层色谱联合高效液相色谱检测动物饲料中甲砜霉素含量的方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种薄层色谱联合高效液相色谱检测动物饲料中甲砜霉素含量的方法，包括以下步骤：

(1)在研磨后的动物饲料中加入乙酸乙酯，涡旋后离心。

(2)取上清液，空气流吹干，先加入乙睛、涡旋，再加入乙睛饱和的正己烷、涡旋，离心，弃去上层正己烷。其中，上清液、乙睛、乙睛饱和的正己烷的体积比为(1-5):(0.05-0.1):(1-5)。

(3)将下层的乙腈层(饲料提取液)和甲砜霉素标准品分别点样于同一块GF-254硅胶薄层板的不同位置，于体积比二氯甲烷:丙酮:氨水等于(3-5):(5-7):(0.05-0.25)的混合液中展开至顶端。所述的氨水的浓度优选为25％-28％。