[发明专利]以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质有效
申请号: | 201711278656.X | 申请日: | 2017-12-06 |
公开(公告)号: | CN107803187B | 公开(公告)日: | 2020-07-14 |
发明(设计)人: | 瞿欢欢;朱至放 | 申请(专利权)人: | 苏州博进生物技术有限公司 |
主分类号: | B01J20/24 | 分类号: | B01J20/24;B01J20/30;C07K1/22 |
代理公司: | 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11369 | 代理人: | 韩飞 |
地址: | 215000 江苏省苏州*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 四肽胃泌素 功能 亲和 层析 介质 | ||
本案设计一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,包括层析基质和配基,所述的层析基质为聚壳聚糖,配基为经二乙烯基亚砜活化后偶联的四肽胃泌素。本发明所研制的新型层析介质,以四肽胃泌素为功能配基,具有显著的疏水性电荷诱导层析分离特点,对抗体具有很高的吸附能力,可以用于抗体的规模化制备。
技术领域
本发明涉及一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。
背景技术
抗体被喻为“生物导弹”,具有专一性强、疗效好、毒副作用小等优点,主要用于治疗恶性肿瘤、重大传染性和免疫系统疾病。预计2011年全球抗体销售额将突破500亿美元,占生物技术药物市场的1/3以上,抗体产业己成为各国生物制药的竞争焦点。不过,我国的抗体产业才刚刚起步。
治疗性抗体的临床剂量大,治疗周期长,高昂的治疗费用让普通患者望而却步,全面降低抗体价格的社会需求十分迫切。随着抗体工程的发展,动物细胞表达水平逐年提高,已达到10g/L以上,培养规模也逐步扩大,大规模培养的生产成本已经大大降低。可是,抗体生产成本的70~80%在分离过程,而分离成本难以通过原有技术的规模放大来解决。当前抗体分离的核心技术是Protein A亲和层析,分离效果好,但也存在一些固有局限,造成分离成本居高不下,成为抗体生产的瓶颈所在。世界各大生物技术公司和研究机构都在积极探索,寻求Protein A亲和层析的替代方法。
发明内容
针对现有技术中存在的技术问题,本案提供一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质。
为实现上述目的,本案通过以下技术方案实现:
一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,其中,包括层析基质和配基,所述的层析基质为聚壳聚糖,配基为经二乙烯基亚砜活化后偶联的四肽胃泌素。
优选的是,所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,其中,所述的层析介质的配基密度为30-120μmol/m3。
优选的是,所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质,其中,包括如下步骤:
1)将层析基质抽干后,加入0.1-0.6倍层析基质质量的25%(v/v)二甲基亚砜、0.5-1.5倍层析基质质量的二乙烯基亚砜和0.3-0.6倍层析基质质量的氢氧化钠,25℃下200rpm摇床中活化5-20小时,抽滤,用去离子水洗涤得到活化层析基质;
2)将活化层析基质和1-3倍层析基质质量的3-巯基丙酸、0.1-0.3倍过硫酸铵混合进行醇化,50℃下200rpm摇床中反应3-7小时,抽滤,用去离子水洗涤,得到醇化的基质;
3)将醇化的基质和0.1-0.3倍层析基质质量的四肽胃泌素以及0.5-1M碳酸钠缓冲液混合,30℃下200rpm摇床中反应5-20小时,得到四肽胃泌素偶联后的介质;
4)将四肽胃泌素偶联后的介质抽滤,去离子水洗涤,加入到环己胺中,30℃下200rpm摇床中反应4-10小时,去离子水洗涤,得到以四肽胃泌素为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。
优选的是,所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质的制备方法,其中,所述环己胺质量和层析基质质量比为1-5:1。
优选的是,所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质的制备方法,其中,所述碳酸钠缓冲液的pH为10-12。
本发明的有益效果是:
(1)抗体吸附容量大,饱和吸附容量可达150mg/ml湿介质,处理能力强;
(2)吸附过程不受盐影响,在很宽的电导率范围(0-100mS/cm)内,吸附容量基本保持不变,无需对料液进行稀释或加盐处理,可以直接捕获蛋白,减少了操作步骤;
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