[发明专利]以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质

说明书

本案设计一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质，包括层析基质和配基，所述的层析基质为聚壳聚糖，配基为经二乙烯基亚砜活化后偶联的四肽胃泌素。本发明所研制的新型层析介质，以四肽胃泌素为功能配基，具有显著的疏水性电荷诱导层析分离特点，对抗体具有很高的吸附能力，可以用于抗体的规模化制备。

技术领域

本发明涉及一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质，属于生物化工领域中的蛋白层析分离技术。

背景技术

抗体被喻为“生物导弹”，具有专一性强、疗效好、毒副作用小等优点，主要用于治疗恶性肿瘤、重大传染性和免疫系统疾病。预计2011年全球抗体销售额将突破500亿美元，占生物技术药物市场的1/3以上，抗体产业己成为各国生物制药的竞争焦点。不过，我国的抗体产业才刚刚起步。

治疗性抗体的临床剂量大，治疗周期长，高昂的治疗费用让普通患者望而却步，全面降低抗体价格的社会需求十分迫切。随着抗体工程的发展，动物细胞表达水平逐年提高，已达到10g/L以上，培养规模也逐步扩大，大规模培养的生产成本已经大大降低。可是，抗体生产成本的70～80％在分离过程，而分离成本难以通过原有技术的规模放大来解决。当前抗体分离的核心技术是Protein A亲和层析，分离效果好，但也存在一些固有局限，造成分离成本居高不下，成为抗体生产的瓶颈所在。世界各大生物技术公司和研究机构都在积极探索，寻求Protein A亲和层析的替代方法。

发明内容

针对现有技术中存在的技术问题，本案提供一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质。

为实现上述目的，本案通过以下技术方案实现：

一种以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质，其中，包括层析基质和配基，所述的层析基质为聚壳聚糖，配基为经二乙烯基亚砜活化后偶联的四肽胃泌素。

优选的是，所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质，其中，所述的层析介质的配基密度为30-120μmol/m³。

优选的是，所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质，其中，包括如下步骤：

1)将层析基质抽干后，加入0.1-0.6倍层析基质质量的25％(v/v)二甲基亚砜、0.5-1.5倍层析基质质量的二乙烯基亚砜和0.3-0.6倍层析基质质量的氢氧化钠，25℃下200rpm摇床中活化5-20小时，抽滤，用去离子水洗涤得到活化层析基质；

2)将活化层析基质和1-3倍层析基质质量的3-巯基丙酸、0.1-0.3倍过硫酸铵混合进行醇化，50℃下200rpm摇床中反应3-7小时，抽滤，用去离子水洗涤，得到醇化的基质；

3)将醇化的基质和0.1-0.3倍层析基质质量的四肽胃泌素以及0.5-1M碳酸钠缓冲液混合，30℃下200rpm摇床中反应5-20小时，得到四肽胃泌素偶联后的介质；

4)将四肽胃泌素偶联后的介质抽滤，去离子水洗涤，加入到环己胺中，30℃下200rpm摇床中反应4-10小时，去离子水洗涤，得到以四肽胃泌素为功能配基的疏水性电荷诱导层析介质。

优选的是，所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质的制备方法，其中，所述环己胺质量和层析基质质量比为1-5:1。

优选的是，所述的以四肽胃泌素为功能配基的亲和层析介质的制备方法，其中，所述碳酸钠缓冲液的pH为10-12。

本发明的有益效果是：

(1)抗体吸附容量大，饱和吸附容量可达150mg/ml湿介质，处理能力强；

(2)吸附过程不受盐影响，在很宽的电导率范围(0-100mS/cm)内，吸附容量基本保持不变，无需对料液进行稀释或加盐处理，可以直接捕获蛋白，减少了操作步骤；