[发明专利]一种检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合及试剂盒与应用

权利要求书

1.一种检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合，其特征在于，所述核酸组合包括检测引物对和检测探针；所述检测引物对包括用于检测SOX1基因甲基化的第一引物对和用于检测PAX1基因甲基化第二引物对；所述第一引物对的碱基序列如SEQ ID NO.1-2所示；所述第二引物对的碱基序列如SEQ ID NO.3-4所示；所述检测探针5'端标记有荧光基团，所述检测探针的3'端标记有淬灭基团；所述检测探针包括检测SOX1基因的第一探针和PAX1基因检测的第二探针，所述第一探针的碱基序列如SEQ ID NO.5所示；所述第二探针的碱基序列如SEQID NO.6所示；

所述检测引物对还包括检测DLX1基因甲基化的第三引物对和第三探针、检测DAPK1基因甲基化的第四引物对和第四探针、检测ADCYAP1基因甲基化的第五引物对和第五探针、检测ITGA4基因甲基化的第六引物对和第六探针、检测mir124a基因甲基化的第七引物对和第七探针、检测RXFP3基因甲基化的第八引物对和第八探针、检测SOX17基因甲基化的第九引物对和第九探针以及检测FAM19A4基因甲基化的第十引物对和第十探针；所述第三引物对至第十引物对的碱基序列如SEQ ID 7-22所示，所述第三探针至第十探针的碱基序列如SEQID 23-30所示。

2.根据权利要求1所述的检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合，其特征在于，所述荧光基团为FAM、VIC、TET、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670、NED中的一种。

3.根据权利要求2所述的检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合，其特征在于，所述淬灭基团为6-TAMRA、BHQ-1～3、和结合分子沟的非荧光淬灭剂中的一种。

4.如权利要求1-3任一项所述的检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合在制备检测宫颈细胞基因甲基化的试剂盒中的应用。

5.一种检测宫颈细胞基因甲基化的试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1-3任一项所述的检测宫颈细胞基因甲基化的核酸组合。

6.根据权利要求5所述的检测宫颈细胞基因甲基化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括核酸提取液、PCR反应缓冲液和PCR反应液中的一种或多种。

7.根据权利要求6所述的检测宫颈细胞基因甲基化的试剂盒，其特征在于，所述核酸提取液包括80-150mmol/L的EDTA、蛋白酶K、8-14mmol/L的Tris饱和酚和12％-15％SDS溶液。

8.根据权利要求6所述的检测宫颈细胞基因甲基化的试剂盒，其特征在于，所述PCR反应液为Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg²⁺的一种或多种。

9.根据权利要求5所述的检测宫颈细胞基因甲基化的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括重亚硫酸盐。