[发明专利]一种基于脐带干细胞及活性成分的软骨损伤混合修复液

说明书

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及一种基于脐带干细胞及活性成分的软骨损伤混合修复液。

背景技术

关节软骨损伤是骨科较为常见的一种疾病。据统计，在行关节镜治疗的患者中，66％的患者存在关节软骨病变，11％的患者有全层软骨损伤。随着高能、高速创伤不断增多和人口老龄化加速，关节软骨损伤和退变的患者日益增多。关节软骨属于透明软骨，表面光滑，呈淡蓝色，有光泽，它是由一种特殊的叫做致密结缔组织的胶原纤维构成的基本框架，这种框架呈半环形，类似拱形球门，其底端紧紧附着在下面的骨质上，上端朝向关节面，这种结构使关节软骨紧紧与骨结合起来而不会掉下来，同时当受到压力时候，还可以有少许的变形，起到缓冲压力的作用。在这些纤维之间，散在分布着软骨细胞，软骨细胞由浅层向深层逐渐由扁平样至椭圆或圆形的细胞组成，这些软骨细胞维持关节软骨的正常代谢。关节软骨没有神经支配，也没有血管，其营养成分必须从关节液中取得，而其代谢废物也必须排至关节液中。因为关节软骨没有血管，因此关节软骨损伤后，自我修复能力很差。由于关节软骨损伤引发的疾病，目前的治疗方法几乎无法根治。

间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)是一种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的多能干细胞，在特定条件下能够向成骨细胞、神经细胞、脂肪细胞、心肌细胞、肌肉细胞、软骨细胞等分化。间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的成体干细胞，在细胞替代治疗和组织工程血方面具有很大的应用价值。间充质干细胞可在骨髓、脐带、皮肤、肌肉、外周血等组织中分离获得，其中人脐带来源的间充质干细胞与其他来源的间充质干细胞相比，脐带的成本较低免疫原性低且来源没有伦理学争议。脐带提取物是从脐带中提取出的包括氨基酸、胶原蛋白、透明质酸在内的多种营养物质的混合物。

目前脐带提取物的制备方法繁琐，无法进行大规模生产和应用。而现有的软骨损伤修复液均存在有效成分单一，治疗效果欠佳等缺点，不能满足软骨损伤患者治疗的需要。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种脐带提取物，其制备方法简单、有效成分丰富，接近关节软骨的微环境。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种脐带提取物，其制备方法包括以下步骤：(1)清洗脐带，去除血液后剪碎；(2)将脐带小块冷冻干燥后，制成冻干粉；(3)将冻干粉溶解于溶剂中，利用超声提取方法进行提取；(4)收集超声提取液，离心，过滤，得到所述脐带提取物。

优选地，所述步骤(1)中脐带去除血液后剪成0.3～0.8cm³的小块；

步骤(2)中将脐带小块冷冻干燥40～56h后研磨成冻干粉；

步骤(3)中将冻干粉按1：(80～120)的料液比加入生理盐水进行溶解，然后超声提取20～45min，提取条件为：功率200～300W，超声5～10s停5～10s；

步骤(4)中离心条件为：2500g离心30min，取上清；8500g离心30min，取上清；28000rpm离心2h，取上清；所述上清经0.22μm和0.45μm双层膜过滤后，即得所述脐带提取物。

优选地，所述步骤(1)中脐带去除血液后剪成0.5cm³的小块；步骤(2)中将脐带小块冷冻干燥48h后研磨成冻干粉；步骤(3)中将冻干粉按1：100的料液比加入生理盐水进行溶解，然后超声提取30min，提取条件为：功率260W，超声8s停8s。

本发明还提供了所述的脐带提取物在制备治疗软骨损伤疾病药物中的用途。

优选地，所述脐带提取物可用于制备软骨损伤修复液。

本发明的另一目的，在于提供一种基于脐带干细胞及活性成分的软骨损伤混合修复液，其含有上述脐带提取物，有利于软骨组织的修复，同时制备方法简单，适用大规模生产。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种基于脐带干细胞及活性成分的软骨损伤混合修复液，其包含间充质干细胞和所述的脐带提取物。

优选地，所述间充质干细胞在软骨损伤混合修复液中的浓度为1×10⁷～6×10⁷cells/mL；优选地，所述间充质干细胞在软骨损伤混合修复液中的浓度为2×10⁷cells/mL。

优选地，所述间充质干细胞来源于脐带。