[发明专利]一种改进的重金属铅人工抗原的合成方法及DOTA在制备重金属铅人工抗原试剂中的用途

权利要求书

1.一种改进的重金属铅人工抗原的合成方法，其特征在于，以2-S-(4-氨基苯)-1,4,7,10四氮杂环壬烷-1,4,7,10-四乙酸为螯合剂，将铅离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA偶联，偶联方法如下：

称取7mg 2-S-(4-氨基苯)-1,4,7,10四氮杂环壬烷-1,4,7,10-四乙酸，溶解于2ml，0.01mol/L，pH7.4 4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液，制备成螯合剂溶液，此反应液为A液；

称取124.19mg硝酸铅溶解于5ml超纯水中，制备成7.5× 10^-2M的硝酸铅溶液，此反应液为B液；

吸取170μl的B液逐滴加入到A液中，室温下避光反应3h，此反应液为C液；

向C液中逐滴加入630μl，20mM的戊二醛溶液，室温避光反应过夜，此反应液为D液；

称取20mg牛血清白蛋白BSA或鸡卵清蛋白OVA溶解于3ml HEPES， 室温下磁力搅拌混匀，此反应液为E液；

将D液逐滴加入到E液中，室温下避光反应24h，后逐滴加入170μl硼氢化钠溶液，室温下避光反应1h；硼氢化钠溶液的配制方法为：20mg硼氢化钠溶解于200μl超纯水中；

反应液先用8KD的透析袋透析3次，再用30KD的超滤离心管7500rpm离心4次，用8ml的0.01M，pH7.4的HEPES溶液复溶，后分装，-20℃低温保存。