[发明专利]一种从男性尿液中提取乌司他丁粗品的方法

说明书

本发明公开了一种从男性尿液中提取乌司他丁粗品的方法。本发明的技术方法是一种将健康成年男性尿液经甲壳素并在一定酸度的条件下进行吸附、吸附物经过一定浓度的氨水进行洗脱、洗脱液加入硫酸铵进行盐析、盐析品经过五氧化二磷干燥得乌司他丁粗品的方法，该方法得到的乌司他丁粗品收率在0.017%以上。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及一种一种从男性尿液中提取乌司他丁粗品的方法。

背景技术

乌司他丁（ULinastatin）系从健康成年男性新鲜尿液中分离纯化出来的一种酸性糖蛋白，是一种广谱的蛋白酶抑制剂，主要在肝脏中合成，由肾脏代谢随尿液排出，且其分解形成的低分子量成分也具有很强的抑制水解酶的作用。乌司他丁由143个氨基酸组成，相对分子质量约37000~43000，属于蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶等丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用，还具有稳定溶酶体膜、抑制溶酶体酶的释放、抑制心肌抑制因子（MDF）产生、清除氧自由基及抑制炎症介质释放的作用。乌司他丁还可改善手术刺激引起的免疫功能下降、蛋白代谢异常和肾功能降低，防止手术刺激引起的对内脏器官与细胞的损伤以及改善休克时的循环状态等。

1909年欧洲首先报道人体尿液存在着胰蛋白酶抑制剂，随后人们发现，当人体受到感染、发热、肿瘤、妊娠、休克、手术、给予糖皮质激素等刺激时，人体尿液中UTI活性升高。1985年由日本首先开发上市，在日本已作为急性胰腺炎、急性循环衰竭的治疗药物被广泛应用于临床。

本发明人自2008年开始对UTI的生产工艺进行试验研究，采用现代蛋白质高端生化分离技术进行生产，使UTI的总收率提高到70%以上，总效价不低于5000iu/mg，生产工艺稳定，质量可控。

发明内容

本发明的目的是提供了一种从男性尿液中提取乌司他丁粗品的方法。

本发明的技术方案是：健康成年男性尿液经甲壳素并在一定酸度的条件下进行吸附、吸附物经过一定浓度的氨水进行洗脱、洗脱液加入硫酸铵进行盐析、盐析品经过五氧化二磷干燥得乌司他丁粗品的方法。

包括如下步骤：

1.甲壳素吸附1.1将合格的男性尿液经过二层纱布过滤，滤入塑料桶中，不断搅拌的同时，以缓慢的速度加入16.5kg甲壳素，并用精密pH试纸测定，调节尿液pH到5.5～6.0之间；搅拌吸附2小时，过滤，弃去尿液，用水洗涤甲壳素去残尿及杂质，至澄清为止；

2.氨水脱附2.1 将5%氨水搅拌洗涤甲壳素1小时，过滤，收集洗脱液；甲壳素再用等量的5%的氨水溶液洗脱1小时，收集洗脱液，合并二次洗脱液；

3.将洗脱液按500g/L的比例，加入固体硫酸铵，搅拌溶解，搅拌后，放置12-16小时沉淀，离心（3500rpm/min-4000rpm/min），收集沉淀的乌司他丁盐析品。

4.将乌司他丁盐析品，用五氧化二磷作吸水剂，真空干燥，干燥后即得粗制品。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例

所述的利用健康成年男性尿液经甲壳素并在一定酸度的条件下进行吸附、吸附物经过一定浓度的氨水进行洗脱、洗脱液加入硫酸铵进行盐析、盐析品经过五氧化二磷干燥得乌司他丁粗品的方法。包括如下步骤：

1.尿液检查

1.1.尿液是否澄清；

1.2 pH试纸检查尿液的pH值是否在6.5以下；

2.甲壳素吸附

2.1取合格尿1.0T用二层纱布过滤，滤入塑料桶中；