[发明专利]蛴螬的检测方法

说明书

本发明公开了一种蛴螬的检测方法，该方法包括薄层色谱鉴别方法和蛴螬中肌苷、鸟苷的含量测定；所述薄层色谱鉴别具体操作步骤为：制备供试品溶液、对照药材溶液，参照薄层色谱法试验，以环己烷：乙酸乙酯：甲醇=10:10:0.5作为展开剂进行展开，在紫外光灯下检视即可；所述肌苷、鸟苷的含量测定，具体步骤为：制备供试品溶液、混合对照品溶液，在下述色谱条件下检测：以乙腈为流动相A,以0.08%三氟乙酸为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为260nm；流速1.0 mL·min^‑1；检测器：紫外；柱温：30℃；进样量：10µL。该检测方法能够对蛴螬材的品质进行有效评估，且方法简单、快速、准确、重现性好。

技术领域

本发明属于中药材检测领域，具体涉及蛴螬的检测方法。

背景技术

蛴螬为金龟子科昆虫朝鲜黑金龟子Holotrichia diomphalia Bates的干燥幼虫。收载于《中药大辞典》下册，第二版3224页，为我国习用药材。蛴螬具有破瘀、散结、止痛、解毒等功效；主血瘀经闭、症瘕、折伤瘀痛、痛风、破伤风、喉痹、痈肿、丹毒等。

大部分文献报道中，蛴螬多采用氨基酸测定、定氮法测定蛋白质等方法进行质量评价，但针对蛴螬的质量控制不具有专属性研究。大黄虫丸(收载于《中国药典》2015年版一部499页)、大黄虫胶囊、大黄虫片、大虻虫丸、干漆丸、山茱萸丸、天浆子丸等成方制剂中均用到蛴螬，并且蛴螬列入《中国药典》2015年版四部成方制剂中本版药典未收载的药材和饮片中。因蛴螬未有完善的质量标准控制方法，地方标准不具有专属性，且国内数十家药品企业生产的中成药中均用到了蛴螬药材，鉴于企业发展与需求，建立蛴螬的质量标准，有助于推行业的规范与发展，为质量评价和控制提供科学、有效的方法和依据。此外，建立蛴螬质量标准对于提升药品质量起到关键作用，具有重要的社会效益和经济效益。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种蛴螬的检测方法，所述方法包括：薄层色谱鉴别和蛴螬中肌苷、鸟苷的含量测定；其中，所述薄层色谱鉴别，具体操作步骤为：取本品粉末2.0g，加甲醇20ml，超声处理10分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蛴螬对照药材2.0g，同法制成对照药材溶液；参照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，按体积配比以环己烷：乙酸乙酯：甲醇＝10:10:0.5作为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；

所述蛴螬中肌苷、鸟苷的含量测定，具体操作步骤如下：

(1)肌苷对照品溶液的制备：精密称取肌苷对照品11.58mg，置20ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得肌苷对照品溶液；

(2)鸟苷对照品溶液的制备：精密称取鸟苷对照品13.41mg，置200ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得鸟苷对照品溶液；

(3)混合对照品溶液的制备：分别精密吸取肌苷对照品溶液、鸟苷对照品溶液各1ml，至10ml容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，得混合对照品溶液；

(4)供试品溶液的制备：取蛴螬药材粉末，混匀，精密称定2.0070g，置具塞锥形瓶中，加入超纯水20ml，精密称定重量,超声处理30分钟，放冷，补足减失的重量,混匀,过滤，得供试品溶液；

(5)色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A,以0.08％三氟乙酸为流动相B，进行梯度洗脱，梯度洗脱条件为：

检测波长为260nm；流速1.0mL·min^-1；检测器：紫外；柱温：30℃；进样量：10μL；

(6)测定：分别精密吸取混合对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱，测定，记录40min的色谱图，即得。