[发明专利]新西兰大白兔腹主动脉粥样硬化斑块内新生血管的造模方法

说明书

技术领域

本发明属于动脉粥样硬化斑块造模领域，特别涉及新西兰大白兔腹主动脉粥样硬化斑块内新生血管的造模方法。

背景技术

心脑血管疾病是人类健康的第一杀手，现已成为中老年人死亡和致残的主要原因，其中不稳定斑块的破裂并继发血栓形成是重要原因。而斑块内新生血管是斑块不稳定的重要特症之一。因为斑块内新生血管的管壁结构不完整仅有一层内皮细胞包绕而成，缺乏周细胞、结缔组织和基底膜的支撑，红细胞、炎性因子以及炎症细胞可以通过内皮间隙渗透到斑块内，导致斑块内出血及炎症反应增强，从而增加斑块的体积，导致斑块的破裂，最终导致急性心脑血管事件的发生。

体内研究(in vivo)是科学研究的主要途径之一，体内研究为富含新生血管的易损斑块提供坚实有效的研究途径。通过in vivo研究，我们可直接观察斑块内新生血管的发生发展，可通过影像方法直接动态观察新生血管对斑块易损性的影响并探索新的检测方法，还可直接研究血管新生使斑块易损的分子生物学机制，斑块组织学成分变化以及可筛选有效的抑制斑块内血管新生，逆转或者稳定易损斑块的药物。

现阶段很多的研究是通过采集临床上接受颈动脉内膜剥脱术(carotid endoarterectomy，CEA)治疗的病人的颈动脉斑块或者尸检来源的颈动脉斑块来进行研究。主要缺点有：

1.病例数偏少：入组病例数少，而且大多缺乏病理对照，现阶段国内的遗体捐献制度还并不完善，大众对于遗体捐献的认识度较低，所以尸源的标本并不能满足当前日益蓬勃的科学研究浪潮。

2.伦理审查严格：不管是遗体捐献还是接受CEA治疗的病人都必须告知本人以及家属，签署知情同意书，步骤繁琐，有时候甚至沟通困难。

3.获取标本时间周期长：为了保证足够的入组数量，就需要一直等待病号或者捐献者，时间难以把控，等待的时间长的需要几个月甚至几年。

4.不能进行干预性前瞻性的研究，只能进行回顾性研究：收集标本的时刻多为病发的时刻，所以只能向前追寻进行回顾性的研究，而不能进行前瞻性的干预研究。

动物疾病模型的建立是我们研究疾病病理特症以及发展最有效的途径和方法之一。现阶段斑块内新生血管模型的建立多使用常用的实验动物有猴、大鼠、小鼠、小型猪和鹌鹑等，现有方法存在的主要缺点有：

1.建模成功率低：其中大鼠没有胆囊对外源性胆固醇不能吸收转化，难以形成动脉粥样硬化斑块病变；经过大量文献的查阅，小鼠斑块内新生血管，多为外膜滋养(vasa vasorum)血管的增多，目前为止并没有文献真正报道了验测到可靠的小鼠主动脉动脉粥样硬化斑块内部处于内中膜的新生血管。

2.成模周期长：小鼠，特别是apoE-/-小鼠，经过高胆固醇饮食喂养能够形成自发的动脉粥样硬化斑块，但是喂养周期长，通常将进20周龄以上才能形成成熟的斑块。

3.费用昂贵：猴与小型猪与人体的生理以及解剖有诸多相似之处，且经过高脂喂养能够形成斑块，是较为理想的动物模型，但是缺陷显而易见，则两种动物研究成本太大，不论从购买费用还是饲养成本来说都较为昂贵。大鼠小鼠等小型动物娇小的体型也限制了它的诸多应用，为了影像学技术的研究，必须配备价格昂贵的小型动物专用的超声机，CT机以及PET，价格动辄数十万以及上百万。

发明内容

为了克服上述不足，本发明提供一种新西兰大白兔腹主动脉粥样硬化斑块内新生血管的造模方法，克服了现有造模方法成膜率低(一般在50％左右)，无法在斑块内形成新生血管的问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种新西兰大白兔腹主动脉粥样硬化斑块内新生血管的造模方法，包括：

向球囊拉伤术+高胆固醇喂养一段时间的新西兰大白兔的腹主动脉方向进IVUS探头，找到腹主动脉最大斑块的位置；

向上述的斑块注射FGF-2，VEGF-A或者二者混合慢病毒，继续高脂喂养一段时间，即得富含新生血管的动脉粥样硬化斑块。

优选的，所述球囊拉伤术+高胆固醇喂养一段时间的新西兰大白兔的具体培养方法为：新西兰大白兔体重1.2－1.4公斤，适应性普通饮食喂养1周后禁食禁水12小时术前准备，按照3wt％的异戊巴比妥1ml/kg麻醉实验动物后，行腹主动脉球囊拉伤术损伤腹主动脉表面血管内皮细胞，手术结束当天即开始行高胆固醇(1wt％纯胆固醇粉+99wt％普通饲料)喂养12周。

优选的，所述向腹主动脉方向进IVUS探头的具体步骤为：