[发明专利]CRISPR-Cas9系统特异性靶向人RSPO2基因的sgRNA及激活方法和应用有效
| 申请号： | 201711286245.5 | 申请日： | 2017-12-07 |
| 公开（公告）号： | CN108251423B | 公开（公告）日： | 2020-11-06 |
| 发明（设计）人： | 虞玲华;姚明 | 申请（专利权）人： | 嘉兴市第一医院 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/867;C12N15/90 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 傅朝栋;张法高 |
| 地址： | 314033 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | crispr cas9 系统 特异性 靶向 rspo2 基因 sgrna 激活 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1. 一种由载体包装的特异性激活RSPO2基因的CRISPR-Cas9系统，其特征在于， 所述的载体为CRISPR-Cas9重组慢病毒载体，其制备方法如下：首先合成寡核苷酸序列，寡核苷酸序列中：正义链：5`-CACC-G-(20N)-3`，反义链：5`-AAAC-(20N的互补序列)-C-3`，其中所述的20N为sgRNA对应的DNA序列；将所述正义链和反义链磷酸化和退火，形成带有BsmBI粘性末端的片段，然后将其连接至经过BmsBI酶切线性化的载体lenti sgRNA(MS2)_zeobackbone上，得到CRISPR-Cas9重组慢病毒载体；所述的sgRNA序列如SEQ ID NO：2、4、6中任意一条所示；所述sgRNA对应的DNA序列分别如SEQ ID NO：1、3、5中任意一条的第1~20位所示，SEQ ID NO：1、3、5中任意一条的第21~23位为该靶序列对应的PAM序列。
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