[发明专利]试剂在制备药物中的用途以及筛选药物的方法

说明书

本发明提出了试剂在制备药物中的用途，所述药物用于抑制下列的至少之一：乳腺癌上皮细胞或乳腺癌细胞的上皮间质转化；乳腺癌肿瘤干细胞的生成；乳腺癌细胞的迁移与侵袭；乳腺癌肿瘤的生长，其中，所述试剂用于抑制miR‑501‑5p。发明人发现，抑制miR‑501‑5p后，乳腺癌上皮细胞或乳腺癌细胞的上皮间质转化、乳腺癌肿瘤干细胞的生成、乳腺癌细胞的迁移与侵袭以及乳腺癌肿瘤的生长均受到显著抑制，用于抑制miR‑501‑5p的试剂所制备的药物可有效抑制上述疾病的发生过程。

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体地，本发明涉及试剂在制备药物中的用途以及筛选药物的方法。

背景技术

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均居全世界女性肿瘤首位，且乳腺癌发病率呈上升趋势。在我国，乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率(粗率)全国合计为42.55/10万，且发病年龄呈现年轻化趋势。全球每年大约有20万患者死于乳腺癌的复发、转移，大约占每年新发乳腺癌患者的20％。在诊断时发生转移的患者，常规的治疗通常最初能够有效的控制疾病的发展，但随着时间的发展，大多数患者最终会病情恶化。因此对于乳腺癌细胞转移、复发根源的研究，和乳腺癌的早期诊断一样具有重要的现实意义。

传统疗法如放疗和化疗能够消除肿瘤肿块，但对少数具有恶性作用的肿瘤细胞仍然不能起到完全杀死的作用，这些恶性肿瘤细胞仍然能够存活并自我更新，进一步发展为恶性肿瘤，这一类细胞就叫做肿瘤干细胞(cancer stem cells，CSCs)。研究发现，肿瘤细胞的异质性是肿瘤干细胞演化成为具有不同生物学特性的癌细胞所造成的，目前常规的肿瘤治疗方法只能消灭大部分的肿瘤细胞，肿瘤干细胞对传统疗法具有抵抗作用，并且能够在某些条件下由非肿瘤干细胞转化而来。研究发现这部分细胞具有自我更新和特定分化的能力，并在维持肿瘤生长、血管生成及促进肿瘤侵袭转移中起决定性作用。到目前为止，已在乳腺癌、白血病、胶质瘤、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、结直肠癌、胃癌和肝癌等恶性肿瘤中发现了肿瘤干细胞的存在。2003年Al-Hajj等首次在乳腺癌标本中分离出乳腺癌干细胞，发现几百个Lin-CD44+CD24-/lowESA+细胞在NOD/SCID小鼠中就可以形成肿瘤。乳腺癌的复发和转移是肿瘤治疗最终失败的原因，消灭肿瘤干细胞是治疗肿瘤、预防复发和转移的关键。因此，寻找能彻底控制乳腺癌干细胞生长的抗癌新疗法，就需要我们深入研究乳腺癌干细胞的自我更新和分化演变的生物学机制。

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是上皮细胞转化为具有间质表型细胞的生物学过程，即上皮细胞向间充质细胞转分化的过程，它不仅赋予乳腺癌细胞迁移和侵袭特征,还可使癌细胞获得自我更新能力而具有干细胞的特性，从而促进乳腺癌肿瘤干细胞的产生，前期研究发现，无论是乳腺上皮细胞还是乳腺癌细胞，经历EMT后其干细胞含量均增加，结果提示EMT和乳腺癌干细胞之间存在直接的联系。Hill等的研究发现缺氧可影响EMT相关基因的表达，进而诱导干细胞表型，提示乳腺癌细胞经历EMT后可以获得干细胞特征，促进乳腺癌肿瘤干细胞的产生。近年来一系列研究结果表明，miRNAs通过负性调控靶基因表达，在乳腺癌EMT过程、肿瘤干细胞产生和维持过程中都发挥重要作用。自分泌或旁分泌的生长激素(hGH)可以通过调控miR-96-182-183的表达促进乳腺癌细胞的EMT过程，并且增加肿瘤细胞的侵袭能力。在紫杉醇耐药的乳腺癌细胞中miR-125b可以通过调控下游靶基因Sema4C调控EMT过程。MiR-200家族可以通过靶向调控ZEB1和ZEB2基因的表达抑制EMT过程和肿瘤细胞的迁移。

EMT是乳腺癌细胞自身塑性的重要标志，深入研究miRNA在EMT与乳腺癌干细胞中的调控作用机制，对于揭开乳腺癌的复发与转移的分子机制研究以及寻找新的乳腺癌靶向治疗方法具有重要的意义。

发明内容

本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：