[发明专利]一种治疗跌打损伤的中药组合物的检测方法

权利要求书

1.一种治疗跌打损伤的中药组合物的检测方法，所述中药组合物是由下列步骤得到的：朱砂12.1份水飞成极细粉；冰片24.2份研磨成细粉；三七121.2份、制川乌12.12份、当归20.2份、醋乳香20.2份、醋没药20.2份、石菖蒲8.1份粉碎成细粉，与朱砂粉末配研，过筛，混匀；其余栀子40.4份、制草乌12.12份、烫骨碎补40.4份、蒲公英60.6份、小蓟6.7份、仙鹤草60.6份、红花40.4份、菊花40.4份、莲子心12.12份、重楼13.5份、醋延胡索20.2等十一味药材加水煎煮二次，每次2小时，分次滤过，合并滤液，浓缩成70～75℃时测相对密度为1.23～1.25稠膏，与上述除冰片外的粉末混合，干燥，粉碎，混匀，加入冰片细粉，混匀；

检测方法包括：当归、冰片、栀子、三七和醋延胡索的薄层色谱鉴别和乌头碱限量的检查方法，其特征在于还包括：

(1)醋乳香的薄层鉴别，具体步骤如下：

(a)供试品溶液的制备：取本品2.5g，混匀，加乙醇20～40ml，超声处理20～30分钟，滤过，滤液挥干，残渣加乙醇1ml，作为供试品溶液；

(b)对照药材溶液的制备：取乳香对照药材0.2g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

(c)阴性样品溶液的制备：取醋缺乳香的处方药材，按处方比例及制备方法按供试品溶液制备方法制成阴性对照液；

(d)色谱条件与操作：照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5～10μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以60℃～90℃石油醚：环已烷：乙酸乙酯：甲酸＝10:30:15:1为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检视；

(e)结果特征：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；经方法学验证其阴性样品无干扰，说明该方法具备专属性的特征；

(2)、菊花薄层鉴别，具体步骤如下：

(a)供试品溶液的制备：取本品6g，研细，加三氯甲烷30～50ml，加热回流30分钟，滤过，弃去滤液，药渣挥干溶剂，加水80～100ml，加热回流40～60分钟，离心，取上清液，加盐酸0.5～1.0ml，用乙酸乙酯振摇提取二次，每次40ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶液，做为供试品溶液；

(b)对照药材溶液的制备：另取菊花对照药材0.5g，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液；

(c)阴性样品溶液的制备：取缺菊花的处方药材，按处方比例及制备工艺按供试品溶液制备方法制成阴性对照液；

(d)色谱条件与操作：照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取上述三种溶液各2～5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，使成条状，以乙酸丁酯：冰醋酸：水＝:2.5:(2.5～3)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；

(e)结果特征：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上,显相同的荧光条斑；经方法学验证其阴性样品无干扰，说明该方法具备专属性的特征。

(3)三七的含量测定方法，步骤如下：

(a)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表进行梯度洗脱；检测波长为203nm，理论板数按三七皂苷R₁峰计算应不低于4000；

(b)对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Rg₁对照品、人参皂苷Rb₁对照品及三七皂苷R₁对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg₁ 0.4mg、人参皂苷Rb₁0.4mg、三七皂苷R₁0.1mg的混合溶液，即得；

(c)供试品溶液的制备取本品，研细，取0.7g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚100ml，低温加热回流提取3小时，弃去乙醚液，药渣挥干溶剂，再加甲醇100ml，继续回流提取4小时，放冷，收集提取液，用甲醇10ml分次洗涤容器及药渣，洗液与提取液合并，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

(d)测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，含人参皂苷Rg₁C₄₂H₇₂O₁₄、人参皂苷Rb₁C₅₄H₉₂O₂₃、三七皂苷R₁C₄₇H₈₀O₁₈的总量不得少于4.8mg；

(4)朱砂含量测定，采用沉淀滴定法测定，步骤如下：取本品，研细，取5g，精密称定，置250ml凯氏烧瓶中，加硫酸20～40ml与硝酸钾7～9g，加热至近无色，放冷，转入250ml锥形瓶中，用水50ml分次洗涤烧瓶，洗液并入溶液中，加1％高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消失，再滴加2％硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml，用0.1mol/L硫氰酸铵滴定液滴定，每1ml硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg的硫化汞HgS，本品每粒含朱砂以硫化汞HgS计，为9.5～13.5mg。