[发明专利]基于铁(II)与邻菲罗啉体系和脂质体包裹葡萄糖的免疫分析方法

说明书

技术领域

基于铁(II)与邻菲罗啉体系和脂质体包裹葡萄糖的免疫分析方法，纳米材料和生物分析技术领域。

背景技术

在畜牧业和农业中过度使用抗生素使得大量食品存在抗生素残留，并对人们的健康具有潜在威胁。对食品中的抗生素残留物的安全检测的重要性极大地推动了对简便型，高灵敏且低成本的生物分析方法的需求。目前为止，各种各样的基于不同信号产生原理的免疫方法和策略已经报道，比如：基于电化学的方法、基于电化学发光的方法、基于化学发光的方法、比色方法。特别是比色免疫方法由于其所具有的简单、方便、实用、低廉和可用肉眼进行可视化检测的优点，已经得到广泛应用。尽管比色免疫反应在这个领域有一些进展，但仍然对于比色法需要开发一些新的信号转换战略。

邻菲罗啉和它的衍生物具有是双齿杂环的配体，已经成功地引入到构建无机、有机、超分子化学。它具有刚性平面结构和电子共轭的芳香杂环因而对各种过渡金属具有强烈的配位能力。近年来，邻菲罗啉和它的衍生物以及金属复合物已经在分子生物领域有了持续深入的研究，比如，DNA/RNA结合，有机金属框架，分子识别传感。利用低势的π反键轨道特征，邻菲罗啉对低氧化态的过渡金属，如Ru(II)、Cu(I)和Co(II)，展现出卓越的络合能力，因而形成金属复合物，这种物质处于金属到配体的电荷转移的低能量状态，电荷转移能谱出现在可见光光谱区而能够被肉眼识别。基于金属到配体电荷转移的比色方法相比于基于贵重金属纳米材料的比色方法展现出更便携的操作和更高的稳定性。

发明内容

基于以上背景，本发明的目的在于提供一种基于铁(II)与邻菲罗啉体系和脂质体包裹葡萄糖的免疫分析方法，该分析方法主要用于食品中链霉素残留的检测。利用脂质体负载的大量葡萄糖偶联链霉素-牛血清白蛋白作为信标产生信号增强，由于酶诱导铁(II)氧化成铁（III）引发铁(II)-邻菲罗啉显色体系颜色及吸光度的改变，利用这个特点，可以建立一个简单、低廉、灵敏且信号增强的可视化检测小分子抗生素的竞争型免疫的新方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种基于铁(II)与邻菲罗啉体系和脂质体包裹葡萄糖的免疫分析方法包括如下步骤：

（1）制备葡萄糖负载的脂质体；

（2）通过交联剂将链霉素-牛血清白蛋白与葡萄糖负载的脂质体交联制成信标；

（3）将抗体固载在微孔板上，加入待测样品与信标混合孵育；用清洗缓冲溶液除去未参与反应的待测样品和信标；

（4）加入曲拉通X-100溶解脂质体；然后加入葡萄糖氧化酶溶液、氯化亚铁溶液混合孵育后，再加入邻菲罗啉显色剂显色，手机记录下检测液的颜色变化用于可视化半定量检测，紫外可见分光光度计进行定量检测。

步骤（1）所述的葡萄糖负载的脂质体是通过逆向蒸发法得到的，所述的脂质体粒径为199 ± 18 nm，Zeta电位为-19.0 ± 0.8 mV。

步骤（1）所述的葡萄糖负载的脂质体所用葡萄糖的量为10 mL，浓度为5 mM。

步骤（2）所述葡萄糖负载的脂质体与链霉素-牛血清白蛋白的结合为共价交联。

步骤（3）所述信标的用量为50 μL。

步骤（4）所述曲拉通X-100的浓度为10 mg ml^-1，用量为100 μL。

步骤（4）所述葡萄糖氧化酶的浓度为1 mg ml^-1，用量为20 μL。

步骤（4）所述氯化亚铁的浓度为5 mM，用量为100 μL。

步骤（4）所述邻菲罗啉的浓度为15 mM，用量为100 μL。

步骤（4）所述孵育时间为30分钟、温度为37°C。

步骤（4）所述显色剂显色时间为50秒。