[发明专利]一种胃蛋白酶制备苦味肽的方法及苦味肽的应用

权利要求书

1.一种胃蛋白酶制备苦味肽的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)制备上清液：清洗大黄鱼，然后去鳞，再用去离子水清洗后，将所述大黄鱼切成鱼块，将所述鱼块与缓冲液放入高速组织捣碎机中打浆并离心，取上清液加热至内源性酶失活，备用；

(2)酶水解制备苦味肽粗液：在所述上清液中加入质量浓度为10g/L的胃蛋白酶，混合搅拌均匀，置于水浴锅中，将pH调至3.5，然后酶解、冷却，调回pH至7.0，定容，离心，上清液即为苦味肽粗液，取所述苦味肽粗液备用；

(3)饱和透明质酸配制：将透明质酸钠盐加入至装有无菌水的器皿中，充分搅拌至形成透明粘性液体，在器皿口覆盖保鲜膜，其中，所述透明粘性液体含有质量浓度为20g/L的透明质酸；

(4)通过非牛顿流体分离制备苦味肽粗浓缩液：在容器中加入所述苦味肽粗液，再加入与所述苦味肽粗液等体积的步骤(3)中的透明粘性液体，此时溶液的上层为所述透明粘性液体，下层为所述苦味肽粗液，将所述溶液经过离心或者静置的离心管收集组分，然后通过感官评定确定苦味肽的组分位置，收集苦味肽组分，获得苦味肽粗浓缩液。

2.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法，其特征在于：步骤(1)中所述鱼块为100g。

3.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法，其特征在于：步骤(1)中所述鱼块与缓冲液的质量比为1：5，所述缓冲液为0.1×PBS。

4.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法，其特征在于：步骤(1)中所述打浆的时间为5-10min，所述离心的转速为6000r/min，时间为5min，所述上清液加热的时间为5min，温度为90℃。

5.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法，其特征在于：步骤(2)中所述水浴锅中水浴的温度为50-60℃，酶解时间为4h，酶解后升温至95℃灭酶15min，所述离心的转速为12000r/min，时间为10min。

6.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法，其特征在于：步骤(2)中所述pH通过1M的HCl调节。

7.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法，其特征在于：步骤(2)完成后，还进行苦味肽粗液感官评定，所述感官评定与步骤（4）中的感官评定的方式相同：由6-9名感官评定人，参加苦味肽的标准曲线建立，即单盲法依次判断出高、中、低苦味浓度，然后依次测试5-100mg咖啡因的感官苦味强度，以形成自身的苦味标准曲线。

8.根据权利要求1所述的胃蛋白酶制备苦味肽的方法，其特征在于：步骤(4)中所述离心的转速为15000r/min，温度为4℃，时间为30min。