[发明专利]一种基于序列特异性核酸结合蛋白的核酸检测和分型的方法及其应用

权利要求书

1.一种非疾病诊断的基于序列特异性核酸结合蛋白的核酸检测和分型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

选择待测核酸上一对Cas9/sgRNA结合位点，针对靶点合成体外转录法制备sgRNA的双链DNA模板；

用T7聚合酶通过体外转录法制备sgRNA；

取链亲和素包被微球磁珠，清洗后，加入生物素修饰捕获序列，室温孵育，再次清洗，将微球转入新管；将磁珠悬浮制备成带有捕获序列的捕获磁珠；

将Cas9蛋白、sgRNA、待测DNA样品混合形成结合反应，室温孵育；

将Cas9、sgRNA、待测DNA结合反应液与捕获磁珠混合，室温孵育；将混合液滴加到载玻片或转移到96孔板中，在倒置显微镜下观察拍照；

通过计数检测溶液中成对、或成堆、或成串微球的数量，可数出检测溶液中目标核酸分子的个数；当待检核酸样品中不存在目标核酸分子时，则无法形成成对、或成堆、或成串的微球，微球呈分散状态存在。

2.一种权利要求1所述的基于序列特异性核酸结合蛋白的核酸检测和分型的方法使用的试剂在制备可视化、数字化核酸快检和分型的试剂中的应用，所述可视化、数字化核酸快检和分型采用的方法为权利要求1所述的方法。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述核酸快检包括床旁即时诊断和野战生化检测。