[发明专利]一种黄精种子超低温保存方法

权利要求书

1.一种黄精种子超低温保存方法，包括步骤以下：

(1)收获黄精鲜果，通风阴干至含水量低于13％，室温下将未去皮的黄精种子用A试剂处理，处理60～120min后，取出处理过的黄精种子；

(2)处理过的黄精种子放入装有B试剂的冻存管中，室温温育10～30min，再将其放入梯度降温盒中；

(3)将带有黄精种子的梯度降温盒放入低温冰箱中，使其降温盒的温度在‐35℃～‐65℃，降温速度为‐1℃/min，然后取出降温盒，马上将此降温盒放入液氮中，进行液氮低温保存备用。

2.根据权利要求1的方法，步骤(1)中所述A试剂是指B5液体培养液，还包含有1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亚砜。

3.根据权利要求1的方法，所述A试剂优选105～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。

4.根据权利要求1的方法，步骤(2)中所述梯度降温盒中含有100％异丙醇或甘油，可以重复使用。

5.根据权利要求1的方法，步骤(2)中所述B试剂是指B5液体培养液，还包含有2.8～3.8mol/L甘油、1.6～2mol/L二甲基亚砜、0.45～0.75mol/L蔗糖和0.5～1.5mol/L抗坏血酸。

6.根据权利要求1的方法，所述B试剂优选105～121℃高压蒸汽灭菌15min以上，冷却至室温放置。

7.根据权利要求1的方法，步骤(3)中所述低温冰箱的温度要求一般在‐70℃以下。

8.根据权利要求1的方法，所述保存未去皮的黄精种子进行解冻时，若室温超过20℃，将冻存管从液氮中取出，直接利用室温自然解冻；若室温低于20℃，将冻存管从液氮中取出，并置于20～24℃水浴箱中解冻；解冻完后，取出冻存管中黄精种子，再用自来水或者蒸馏水洗涤3～5次，清洗去皮后的黄精种子直接用于培养。