[发明专利]一种人造红细胞马达及其制备方法

权利要求书

1.一种人造红细胞马达，其特征在于，其包括天然血红蛋白形成的红细胞状骨架、位于所述骨架内部的磁性纳米颗粒和表面修饰的细胞膜。

2.根据权利要求1所述的人造红细胞马达，其特征在于，所述磁性微纳米颗粒为四氧化三铁颗粒，且所述四氧化三铁颗粒的粒径为5nm-500nm。

3.根据权利要求1所述的人造红细胞马达，其特征在于，所述天然血红蛋白包括猪源血红蛋白、马源血红蛋白或牛源血红蛋白中的一种。

4.根据权利要求1所属的人造红细胞马达，其特征在，所述细胞膜包括红细胞膜、白细胞膜或血小板膜中的一种。

5.制备如权利要求1-4任一项所述的人造红细胞马达的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤一、制备所述磁性微纳米颗粒；

步骤二、通过化学共沉淀法，合成内含有步骤一所述的磁性微纳米颗粒和天然血红蛋白的红细胞状内核；

步骤三、以步骤二所述的红细胞状内核为模板，利用细胞膜融合技术将天然细胞膜修饰到所述模板的表面上，获得人造红细胞马达骨架；

步骤四、利用溶剂溶解法去除步骤三得到的所述人造红细胞马达骨架中的内核，最终得到人造红细胞马达。

6.根据权利要求5所述的人造红细胞马达的制备方法，其特征在于，步骤二中所述内核为氢氧化钙颗粒，且所述内核的粒径为2μm-100μm。

7.根据权利要求5所述的人造红细胞马达的制备方法，其特征在于，步骤四中所述溶剂为浓度为0.01-0.1mol/L、pH为5.0-7.0的磷酸盐缓冲液，浓度为0.005-0.05mol/L的稀盐酸溶液或pH值为7.0、浓度为0.1-1mol/L的乙二胺四乙酸二钠盐溶液中的一种。

8.根据权利要求5所述的人造红细胞马达的制备方法，其特征在于，步骤四中所述红细胞马达的直径为2μm-100μm，厚度为500nm-5μm。

9.根据权利要求5所述的制备人造红细胞马达的方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤一、制备所述磁性微纳米颗粒：a、将0.002-0.02mol的氯化亚铁和0.004-0.04mol的氯化铁按1:2的重量比例溶解到100-1000mL的去离子水中，氮气保护下加热到70℃，搅拌的同时加入40mL氨水；b、继续反应1小时后停止加热，装有上述反应液体的烧瓶置于磁铁上，静置30min，待形成的四氧化三铁颗粒完全沉积到所述烧瓶的底部后，去除上层液体；c、利用丙酮清洗所述四氧化三铁颗粒3-4次后，向所述烧瓶中加入25mL不含氧气的去离子水，得到四氧化三铁颗粒悬浮液；

步骤二、合成红细胞状氢氧化钙颗粒：a、将100-1000mg的天然血红蛋白、0.5-5g的硫酸葡聚糖分散到100mL浓度为0.05-0.5mol/L的CaCl2溶液中,得到混合溶液A；b、向20mL浓度为0.5-5mol/L的氢氧化钠溶液中添加步骤一所述的磁性四氧化三铁颗粒悬浮液,得到混合溶液B；c、将所述混合溶液A肯所述混合溶液B迅速混合后超声10秒钟；d、静置20min后离心收集，即得到含有所述磁性四氧化三铁颗粒和所述天然血红蛋白的红细胞状氢氧化钙颗粒；

步骤三、制备人造血红蛋白马达骨架：a、充分利用血液内不同细胞密度不同的特性，使用Ficoll密度梯度离心法，以4500rpm/min的速度离心人体血液，分离、收集细胞，利用低渗缓冲液4℃下低渗处理细胞24小时，以充分去除细胞内的内容物；b、使用迷你挤压器，反复挤压细胞穿过孔径为200nm的聚氨酯薄膜21次，制备粒径为200nm的细胞膜纳米囊泡；c、以步骤二中所述含有磁性四氧化三铁颗粒和天然血红蛋白的红细胞状氢氧化钙颗粒为内核，内核与b中所述的细胞膜纳米囊泡充分混合，基于细胞膜融合技术，利用超声仪在59kHz频率下超声融合30min，在所述内核表面融合细胞膜，完成所述人造血红蛋白马达骨架的制备。

步骤四、溶解内核：将步骤三所述的人造血红蛋白马达骨架加入到浓度为0.01-0.1mol/L、pH范围为5.0-7.0的磷酸盐缓冲液，浓度为0.005-0.05mol/L的稀盐酸溶液或pH值为7.0、浓度为0.1-1mol/L的乙二胺四乙酸二钠盐溶液中，30min后离心分离，弃去上清液，所得沉淀用pH7.4的磷酸盐缓冲液清洗三次，最终得到所述人造红细胞马达。