[发明专利]一种基于三嗪环结构限定性N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉抗原、抗体及应用

说明书

本发明一种基于三嗪环结构限定性N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原、人工抗原、抗体及应用。所述N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉半抗原的结构如式I所示：其中R为‑H和‑CH3。并以此制备了N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉人工抗原和抗体，对N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉的检测效率高、操作简便，可用于N‑(2‑胍基‑乙亚氨基)‑吗啉的酶联免疫快速检测；且本发明的抗原抗体合成过程简单、成本较低，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于药物残留分析检测技术领域。更具体地，涉及一种基于三嗪环结构限定性N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉半抗原、人工抗原、抗体及应用。

背景技术

N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉盐酸盐(Moroxydine Hydrochloride，简称盐酸吗啉胍，俗称“病毒灵”)，其核心有效成分为N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉，分子式为C6H13N5O·HCl，分子量为207.66。由于N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉能有效降低或抑制病毒的DNA聚合酶、RNA聚合酶的活性和蛋白质的合成等，其作为一种非核苷类广谱抗病毒药物，不仅广泛的应用于治疗流感、疱疹和水痘等病毒引起的疾病，在养殖业和种植业病毒性疾病防治方面应用也较多。

2014年，西安、吉林等地曝光了多起“病毒灵”事件，引起了人们对该药物的广泛关注。事件的起因主要是幼儿长期服用盐酸N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉片，导致不少学生出现了腹痛、心慌、皮痒、呕吐、头晕等状况，严重者还会出现心悸、低血糖、呼吸急促、寒颤等反应。由此可知，盐酸N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉作为抗病毒药仍然有其疗效不确切，处方是否合理等问题。目前可以从烟草、糙米、番茄、蜂蜜和动物组织等中检测到N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉的残留，另外，在环境土壤中的残留情况也不太乐观，这些情况不仅会导致耐药性病毒的增加，而且为人们的健康埋下了安全隐患。因此对动植物源性食品和环境中N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉残留的检测具有重要意义。

目前，对于药品和食品中N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉的传统的检测方法，大多依靠常规仪器分析方法，如高效液相色谱法、液相色谱-电喷雾串联质谱法等方法。这些方法存在周期长、专业性强，费用高等缺点，难以满足现场快速检测的需要，在应用上不能广泛推广。基于抗原-抗体特异性识别的酶联免疫分析方法(ELISA)具有快速、灵敏、准确等优点，特别适用于现场进行高通量检测。另外，ELISA因其能弥补仪器法的上述不足，已在食品安全检测中发挥了重要作用。

而ELISA法对于抗原、免疫原的选择要求较高，小分子化合物(MW≤1000Da)一般不具有免疫原性，不能直接免疫动物产生特异性抗体，但可与抗体产生反应，即具有反应原性。如果将小分子连接到具有免疫原性的大分子(通常为蛋白质)上，做成人工抗原，就可能使机体产生免疫应答，产生针对小分子结构的抗体。因为不是任何小分子与大分子载体连接都能产生特异性抗体，所以小分子半抗原结构的设计非常重要。建立酶联免疫分析方法的关键在于其半抗原和人工抗原的设计和合成。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述现有N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉检测技术存在的存在周期长、专业性强、成本高，不适宜现场大批量快速检测，以及无法实现N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉的直接快速检测等问题、缺陷和不足，提供一种基于三嗪环结构限定性N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉半抗原，同时提供由所述半抗原偶联载体蛋白制备的人工抗原，以及免疫实验动物后使机体产生特异的针对N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉的抗体；可用于N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉的检测，检测效率高、操作简便。