[发明专利]以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用

权利要求书

1.以TIPE2基因为靶点在制备治疗肿瘤的药物中的应用，所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达；所述肿瘤为原发性肿瘤或转移性肿瘤。

2.以TIPE2基因为靶点的肿瘤浸润白细胞在制备治疗肿瘤的药物中的应用，所述以TIPE2基因为靶点包括采用基因敲除、基因敲减或者化学药物降低TIPE2基因的表达；所述肿瘤为原发性肿瘤或转移性肿瘤。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于；所述应用包括基于所述肿瘤浸润白细胞进行免疫疗法治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤。

4.一种TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞。

5.根据权利要求4所述的TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞的制备方法，其特征在于：包括以下步骤，

采用皮下注射方式给TIPE2基因缺失的小鼠进行肿瘤细胞种植；

待种植的肿瘤细胞生长为肿瘤组织块后，从小鼠身上取下肿瘤组织块，采用酶混合液对肿瘤组织块进行消化，所述酶混合液包括胶原酶I、胶原酶IV、透明质酸酶和脱氧核糖核酸酶；

消化完成后采用RPMI 1640完全培养基终止消化，将肿瘤组织块置于细胞筛网上研磨，收集通过细胞筛网的组织研磨液；

对所述组织研磨液进行4℃低速离心，获取细胞上清液，弃沉淀杂质；对细胞上清液进行4℃高速离心，收集沉淀细胞；

将收集的沉淀细胞用RPMI 1640完全培养基重悬，采用小鼠肿瘤组织淋巴、单核巨噬、粒细胞分离液试剂盒对收集的沉淀细胞进行分离，具体的，将细胞的RPMI 1640完全培养基重悬液加入按照试剂盒配制的分离液液面上，1260g、25℃离心后，用吸管吸取并收集离心管中出现的两层环状的乳白色细胞层；

采用PBS溶液洗涤所收集的乳白色细胞层，1260g，4℃离心，弃上清，再采用PBS重悬，获得PBS细胞悬液，即所述TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：给TIPE2基因缺失的小鼠进行肿瘤细胞种植，其中所采用的肿瘤细胞为LLC小鼠肺癌细胞或B16F10小鼠黑色素肿瘤细胞；种植LLC小鼠肺癌最终获得TIPE2基因敲除的肺癌肿瘤浸润白细胞；种植B16F10小鼠黑色素肿瘤细胞最终获得TIPE2基因敲除的黑色素肿瘤浸润白细胞。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：所述酶混合液中含有50mg/mL的胶原酶I、50mg/mL的胶原酶IV、5mg/mL的透明质酸酶和1U/mL的脱氧核糖核酸酶。

8.根据权利要求5-7任一项所述的制备方法，其特征在于：所述肿瘤细胞种植中，种植肿瘤细胞的量为每只小鼠2×10⁶个肿瘤细胞。

9.根据权利要求5-7任一项所述的制备方法，其特征在于：所述从小鼠身上取下肿瘤组织块，具体包括，将脱颈处死的小鼠浸泡于75％酒精中，随后将小鼠放置于无菌超净台上，用手术剪刀和镊子取下肿瘤组织块。

10.根据权利要求4所述的TIPE2基因敲除的肿瘤浸润白细胞在制备治疗原发性肿瘤或转移性肿瘤的药物中的应用。