[发明专利]一种从亚肉座菌中提取6;8-二羟基-3-羟甲基异香豆素的方法

说明书

本发明提供了一种从亚肉座菌中提取6,8‑二羟基‑3‑羟甲基异香豆素的方法，包括：1)活化菌株；2)初级培养；3)大米发酵；4)用乙酸乙酯浸泡提取；5)将浸出液旋转浓缩，拌样，进行200~300目硅胶柱层析，旋蒸浓缩，甲醇洗出，自然挥干；6)液相制备，经NMR、EI‑MS谱图分析得到6,8‑二羟基‑3‑羟甲基异香豆素。本发明以繁殖快、周期短的真菌为材料，成本低，操作简单，重复性好，不需要复杂设备和通过简单的方式即可制得纯的物质。

技术领域

本发明涉及从亚肉座菌中提取6,8-二羟基-3-羟甲基异香豆素的方法。

背景技术

亚肉座菌是狭义座壳孢菌的有性型，隶属子囊菌门(Ascomycota)、粪菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌目(Hypocreales)、麦角菌科(Clavicipitaceae)，常见于热带地区，特别是在原始森林中，是一类常见的重要昆虫病原真菌，主要通过侵染介壳虫（Lecaniidae与Coccidae）和粉虱（Aleyrodidae）起到了控制害虫种群数量的重要目的，从而表现出显著的生物防治前景。另外其代谢产物具有较好的抗菌、杀疟原虫活性，并对昆虫细胞和肿瘤细胞有较强的毒性，对哺乳动物细胞却几乎无毒。

在现今社会，各种疾病横行。6,8-二羟基-3-羟甲基异香豆素已知具有中等的抗疱疹病毒和结核分枝杆菌的作用，IC50分别为50µg/mL和25µg/mL，表现出了潜在的医药作用（Kornsakulkarn J, Thongpanchang C, Lapanun S, Srichomthong K. Isocoumaringlucosides from the scale insect fungus Torrubiella tenuis BCC 12732. Journalof Natural Products, 2009, 72(7): 1341-1343.；Zhou M, Lou J, Li YK, Wang Y,Zhou K, Ji BK, Dong W, Gao XM, Du G, Hu QF. Versicolols A and B, two newprenylated isocoumarins from endophytic fungus Aspergillus versicolor andtheir cytotoxic activity. Archives of Pharmacal Research, 2015: 1-5.）。寻找不同来源的有效抗癌药物早已备受关注，虫生真菌的代谢物中含有多肽、生物碱、萜类化合物、甾醇等多种杀虫、抗肿瘤、抗炎、抗菌的物质。因此，对虫生真菌的充分开发利用，将有利于人类医疗水平的发展。

发明内容

本发明的目的是提供从亚肉座菌中提取6,8-二羟基-3-羟甲基异香豆素的方法，以促进其作为先导化合物的开发和应用。

本发明采取的技术方案如下：

从亚肉座菌中提取6,8-二羟基-3-羟甲基异香豆素的方法，包括以下步骤：

1）将亚肉座菌活化后，取菌块接种PDB培养基中，在125r/min、25℃条件下连续培养7天即种子培养，按10％接种量再次转接到PDB培养基中，继续在125r/min、25℃条件下连续培养14天即初级培养，第三次按10%的接种量转接于大米培养基上，静置培养30天。

2）用乙酸乙酯反复浸泡培养基，超声，重复3-5次。合并浸泡液，旋蒸得菌初提浸膏。