[发明专利]一种模拟生物应激反应诱导银杏快速积累银杏内酯的方法

说明书

本发明提供了一种模拟生物应激反应诱导银杏快速积累银杏内酯的方法，属于生物技术和植物学技术领域。通过模拟自然生长条件培养银杏植株，使用植物激素茉莉酸甲酯(MeJA)诱导，并采用高效液相色谱‑蒸发光散射法检测分析银杏内酯的积累动态变化情况。探寻不同诱导浓度及时间条件下，银杏内酯含量的变化情况，从而确定MeJA的浓度、诱导时间，从而筛选出MeJA诱导快速积累银杏内酯的最佳诱导条件，为提高银杏内酯产量提供切实有效的依据，为银杏叶采收前处理提供科学依据。

技术领域

本发明涉及一种采用模拟生物应激反应诱导银杏快速累积银杏内酯的方法，属于生物技术和植物学技术领域。

背景技术

银杏(Ginkgo biloba L)是银杏科银杏属的多年生裸子植物，是具有“活化石”之称的现存最古老的树种之一，银杏在传统中药中主要以种子白果入药。近现代以来，银杏叶提取物以及银杏内酯使用价值逐渐被开发利用，而今作为植物药银杏叶提取物已经在国内外广泛销售，具有改善记忆，增加血液循环，以及治疗阿尔茨海默病等功效。

银杏内酯(ginkgolides)是银杏叶中特有的萜类活性成分，包括二萜内酯类的银杏内酯A、B、C、J、K、L、M和倍半萜内酯白果内酯(bilobalide)。银杏内酯具有清除自由基及抑制细胞膜脂质过氧化，防止血管内皮细胞和脑细胞受损；扩张血管，增加血流量，降低心脑血管的阻力；抗血小板聚集，降低血液黏度，降血脂、抗动脉粥样硬化，改善心脑循环和代谢等药理作用(参见文献王雁，杨义芳.银杏叶的药理作用及其机制的研究进展[J].中国现代应用药学，2001，18(1)：1-3.刘彬果，张新萍，刘岩.银杏叶中萜内酯类化合物的研究进展[J].药学实践杂志，2011，29(6)：421-425)。并且，在银杏内酯中以银杏内酯A、B、C及白果内酯(结构如图1)含量最多，药效明显，药用需求量大，尤其是在心脑血管疾病的治疗方面具有独特的优势，因此市场需求量大。

目前，市场上的银杏内酯主要来源于银杏叶提取，然而银杏叶中银杏内酯的含量很低，这使银杏内酯大规模商业化生产受限制。由于银杏内酯结构较复杂，化学合成成本极高，而银杏为裸子乔木，采用水培、组织培养，毛状根培养，转基因毛状根培养等现代化快速繁殖方法受到限制，并且银杏内酯合成通路尚不清晰，因此利用合成生物学方法发酵生产银杏内酯暂时也不具备可行性。

本专利中用植物激素茉莉酸甲酯(MeJA)刺激银杏植株使其有效萜类物质银杏内酯迅速积累，从而提高其产量。该方法是在传统银杏人工栽培采收工序上配合增加MeJA诱导，步骤简单，方法易行，可操作性强，不需要复杂的技术条件以及专业设备，只要确定合适的浓度和处理时间即可，栽培工作人员可以轻松掌握。而且经实例证明本专利所述方法能明显快速累积银杏内酯的含量。同时MeJA模拟生物应激反应诱导次级代谢产物银杏内酯生产，天然绿色，对环境以及植株无伤害作用。

因此，利用MeJA诱导银杏合成银杏内酯等萜类化合物的方法对银杏内酯产量的提高具有极大的实际应用价值。

目前，尚无文献报道人工栽培结合MeJA诱导银杏快速累积银杏内酯的方法。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种将人工栽培与MeJA模拟生物应激反应诱导相结合的银杏栽培及处理方法，促进银杏叶中银杏内酯的快速积累，提高栽培药用银杏叶中银杏内酯的含量。

本发明涉及应用于栽培银杏的MeJA模拟生物应激反应诱导方法，包括诱导浓度及诱导后采收时间的确定，同时为提高银杏内酯产量提供有效实用依据，对银杏叶采收前处理提供科学依据。

本发明是由以下步骤组成：

(1)MeJA溶液的配置

将MeJA(纯度为95％)先溶解于0.5ml的乙醇中，之后溶解于400ml纯水中，分别配制成浓度为0、100、200、400、600、800μmol/L的MeJA水溶液。

(2)银杏幼苗MeJA的诱导