[发明专利]一种黄单胞杆菌发酵生产葡甘聚糖酶的方法

说明书

本发明涉及真菌的发酵培养基及工艺，具体涉及一种黄单胞杆菌产葡甘聚糖酶的方法。所述产葡甘聚糖酶发酵培养基含甘露醇12 g/L，蛋白胨16 g/L，Mn²⁺ 399.04 g/L，维生素B₂ 0.02 g/L，pH 5.6。将发酵种子液5mL接种于发酵初始培养基中，于150 r/m、35℃条件下培养34 h制成初始发酵液。将摇瓶培养好的初始发酵液，于4℃、10000 r/m的条件下离心10 min，取上清进行酶活测定。本发明的发酵方法有发酵周期短；条件温和，易于控制；培养基具有葡甘聚糖酶产率高，葡甘聚糖酶活力高等优点。

技术领域

本发明涉及细菌的发酵培养及工艺，具体涉及一种黄单胞杆菌发酵生产葡甘聚糖酶的培养基及方法。

背景技术

葡甘聚糖(Konjac Glucomannan，KGM)是一种天然高分子杂多糖，它是魔芋的主要成分，由D-甘露糖与D-葡萄糖残基按照1.69:1(白魔芋，A.albus)或1.5或1.6:1(花魔芋，A.konjac)的分子比基于β-1,4-糖苷键相连接而成，其水溶性和凝胶性显著高于普通魔芋精粉，从而替代了普通魔芋精粉，并具有防止便秘的功效，还是一种植物性胶体且具有独特的理化性质，因而拥有广泛的开发价值和应用前景。

葡甘聚糖酶(glucomannanase)是一种胞外分泌酶，它能够降解魔芋主要成分葡甘聚糖为葡甘低聚糖。有学者用从魔芋废渣中分离到的枯草芽孢杆菌B23生产葡甘聚糖酶，用来自海洋的枯草芽孢杆菌Q1生产葡甘聚糖酶。目前葡甘聚糖酶的生产菌株，主要集中在枯草芽孢杆菌上，本发明采用的是植物病原菌黄单胞杆菌属的甘蓝黑腐黄单胞菌桃穿孔致病型，以拓宽产葡甘聚糖酶的菌株资源。因此研究黄单胞杆菌葡甘聚糖酶具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种黄单胞杆菌发酵生产葡甘聚糖酶的培养基及方法，具有葡甘聚糖酶产率高，活力高等优点。

本发明采取的技术方案如下：

一种黄单胞杆菌发酵生产葡甘聚糖酶的初始培养基原料，含甘露醇12g/L，蛋白胨16g/L，Mn²⁺399.04g/L，维生素B₂0.02g/L；pH为5.6。

本发明的显著优点在于：

本发明的发酵方法有发酵周期短；条件温和，易于控制；培养基具有葡甘聚糖酶产率高，葡甘聚糖酶活力高等优点。

附图说明

图1不同碳源对黄单胞杆菌产葡甘聚糖酶的影响；

图2不同氮源对黄单胞杆菌产葡甘聚糖酶的影响；

图3不同金属离子对黄单胞杆菌产葡甘聚糖酶的影响；

图4不同维生素对黄单胞杆菌产葡甘聚糖酶的影响；

图5不同pH对黄单胞杆菌产葡甘聚糖酶的影响。

具体实施方式

本发明用下列实施例来进一步说明本发明，但本发明的保护范围并不限于下列实。

实施例1：单因素实验确定培养基最优成分

1)种子培养基配制：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，pH为7，121℃灭菌20min。

2)发酵种子的制作：将黄单胞杆菌接种于LB固体平板培养基上，于35℃下培养24h，即活化；将活化后的菌株用接种针将菌体接种至种子培养基，35℃，转速150r/min下培养24h，即为发酵液。

3)酶液的制备