[发明专利]一种高通量的光电化学酪氨酸酶传感器有效
| 申请号： | 201711316297.2 | 申请日： | 2017-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN108107094B | 公开（公告）日： | 2019-09-03 |
| 发明（设计）人： | 王光丽;袁芳;王红;董玉明 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | G01N27/30 | 分类号： | G01N27/30;G01N27/327 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 光电化学 阴极 醌类化合物 酶传感器 高通量 量子点 传感器 空穴 酪氨酸酶催化 酪氨酸酶活性 电子受体 高选择性 共价键合 光电阴极 光生电子 酪氨酸酶 原理构建 光电极 光电流 壳聚糖 酶固定 氧化酚 沉积 化合 修饰 灵敏 复合 检测 | ||
1.一种高通量的光电化学酪氨酸酶测定方法，其特征在于：
a、以巯基乙酸作为表面修饰剂制备水溶性PbS量子点，具体步骤为：将一定体积的巯基乙酸和25mL4.0mmol/L的Pb(CH3COO)2溶液搅拌混合后，用1mol/L的NaOH溶液调节溶液的pH为8.0；然后将反应溶液除氧30min，之后加入2.0mL浓度为0.02mol/L的Na2S水溶液，在一定温度下除氧反应一段时间，得水溶性PbS量子点；
b、将PbS量子点与壳聚糖依次修饰到电极表面：将预处理的ITO玻璃片浸在含有NaCl的2％PDDA聚合物的溶液中，10min后洗净；然后再浸入到水溶性PbS量子点溶液中，30分钟后取出洗净；用pH＝4.0的醋酸缓冲配制2wt％质量浓度的壳聚糖溶液，之后用pH＝7.0的醋酸缓冲液稀释成0.5wt％的浓度；吸取20μL稀释后的壳聚糖溶液滴加到PbS量子点电极上，在室温下干燥，备用；
c、酪氨酸酶活性的测定：在96微孔板中，将20μL不同浓度的酪氨酸酶、20μL1mmol/L的酪氨酸酶底物和160μL浓度为0.1mol/L的pH＝7.0磷酸盐缓冲溶液混合，37℃下震荡反应90min；随后，将制备好的沉积了PbS以及壳聚糖的光电极浸没在上述反应后的溶液中，10min后取出洗涤，将电极放在盛有除氧后的0.1mol/L的pH＝7.0Tris-HCl缓冲溶液中进行光电化学检测。
2.根据权利要求1所述的一种高通量的光电化学酪氨酸酶测定方法，其特征在于PbS量子点合成时加入的巯基乙酸的体积为8-15μL。
3.根据权利要求1所述的一种高通量的光电化学酪氨酸酶测定方法，其特征在于PbS量子点合成时的反应温度为0-30度，反应时间为2-5小时。
4.根据权利要求1所述的一种高通量的光电化学酪氨酸酶测定方法，其特征在于测定时使用的酪氨酸酶底物为苯酚或酪氨酸或邻苯二酚中的一种。
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