[发明专利]基于脂溶性量子点的筛选最佳产油藻种的方法

权利要求书

1.一种基于脂溶性量子点CdSe/CdS的筛选最佳产油藻种的方法，其特征是：包括下列步骤：

（1）藻的培养使用：将小球藻利用BG11培养基扩大培养后，又按三种不同条件分类培养藻种，各培养条件如下：A培养于光照培养箱中，光照时间是14h/d，光暗比7：5，光照强度是10000lx，恒温25℃，用BG11液体培养基培养；B处于摇床中，摇床转速是1500r/min，光照时间为12h/d，光暗比是1:1，光照强度为6000lx，有光照时温度为25℃，无光照时为室温，用80%体积分数的BG11培养基和20%体积分数的水混合培养；C培养于普通室内环境，通过BG11培养基提供营养，由碘钨灯提供光源和热源，光照时间为24h/d，温度控制在28—32℃范围内；

使用藻液时取对数生长末期藻液，用离心机3500转/分钟离心8分钟后弃上清液，加入PBS缓冲液重悬，3500转/分钟离心8分钟，重复三次洗净藻种后，用PBS缓冲液冲洗出藻种配制成相应浓度藻液待用；

（2）吸光度与藻细胞密度的线性关系的确定：

利用血球计数板和显微镜数数方法测定藻液细胞密度，同时测定藻液在600nm的光吸收值OD₆₀₀，得到吸光度与藻细胞密度的线性关系；

（3）二甲基亚砜与量子点荧光的测定：

取量子点母液2ml、丙酮8ml稀释为6mg/ml的溶液10ml；给四个洗净烘干的锥形瓶依次编号，向其中分别加入①10mlPBS缓冲液、②8mlPBS缓冲液+2ml二甲亚砜、③9mlPBS缓冲液+1ml量子点溶液、④7mlPBS缓冲液+2ml二甲亚砜+1ml量子点溶液；反应五分钟后在380nm激发波长处依次测定四组样品荧光光谱；

（4）含有二甲基亚砜与量子点的藻液荧光测定

取 OD₆₀₀值为0.445的藻液，向四个洗净烘干的锥形瓶中依次加入①10ml藻液、②9ml藻液+1ml量子点溶液、③8ml藻液+2ml二甲亚砜溶液、④7ml藻液+2ml二甲亚砜+1ml量子点溶液；反应五分钟后，依次于380nm激发波长处扫描测定500nm—710nm发射波长范围内的荧光谱峰，绘制曲线比较分析二甲亚砜和量子点对藻液荧光的影响；

（5）最佳量子点浓度的测定

取量子点母液，分别稀释为2mg/ml、4mg/ml、6mg/ml、8mg/ml、10mg/ml、12mg/ml浓度待用；取 OD₆₀₀值为0.445的A类藻液；向编号为1—7的锥形瓶中都加入7ml藻液、2ml二甲亚砜；并对应编号分别添加1ml量子点溶液，浓度分别为0 mg/ml、2 mg/ml、4 mg/ml、6 mg/ml、8mg/ml、10 mg/ml、12 mg/ml；反应五分钟，测定各样品荧光值；

（6）最佳藻液密度的测定

取藻液适量，配制成OD₆₀₀值分别为0.132、0.224、0.354、0.445、0.519、0.635的藻液待用，依次编号为1—6；向①—⑥号锥形瓶中依次对应编号加入以上藻液各7ml，再分别加入二甲亚砜2ml、8mg/ml量子点溶液1ml，反应五分钟后检测荧光；绘制各藻液密度条件下荧光光谱图；藻液密度从0.629×10⁶个/ml增加到4.208×10⁶个/ml时，555nm处相对荧光强度伴随着细胞密度的变化先增后减；藻液密度达到3.284×10⁶个/ml时，相对荧光强度最高，达到969.8；

（7）优势藻种的筛选

取OD₆₀₀为0.519的 A、B、C三类藻液，向编号为A、B、C的锥形瓶中依次对应编号加入A、B、C藻液7ml，再分别加入二甲亚砜溶液2ml与8mg/ml量子点溶液1ml；反应五分钟后，于380nm激发波长处测定各样品在500—710nm发射波长范围的荧光曲线；

（8）最佳产油藻种的确定：

绘制三组藻液的荧光谱峰；C类藻液相对荧光强度最高；A类次之，B类最低；这说明BG11培养基提供营养，碘钨灯提供光源和热源,光照时间为24h/d，温度在28—32℃范围内的培养条件最有利于小球藻的油脂积累。