[发明专利]一种中间体2’-脱氧鸟苷的制备方法

权利要求书

1.一种采用重组N-核苷脱氧核糖转移酶的制备中间体2’-脱氧鸟苷方法，其特征在于：将重组N-核苷脱氧核糖转移酶的工程菌株大肠杆菌 DNTase-1接入培养基进行诱导培养，从而获得重组表达的N-核苷脱氧核糖转移酶，重组N-核苷脱氧核糖转移酶的大肠杆菌工程菌株发酵培养完毕后，将发酵液转入生物催化反应器中，按照生物催化反应条件，加入生物催化反应底物进行生物催化制备2’-脱氧鸟苷，所述重组N-核苷脱氧核糖转移酶的工程菌株大肠杆菌 DNTase-1已保藏于已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为 C C T C CN o ：M2017060，保藏时间为2017年2月23号，保藏地址为中国武汉，武汉大学，邮编430072。

2.根据权利要求1所述的一种重组N-核苷脱氧核糖转移酶的制备方法，其特征在于：所述培养基为自诱导培养基：酵母浸粉 20g/L，鱼蛋白胨12.5g/L，磷酸氢二钾 2.5g/L，氯化钠 5.0g/L，七水合硫酸镁 1.0g/L，乳糖 3.2g/L，甘油 5.5g/L，pH 6.5；培养条件为：培养温度32℃，时间24h。

3.根据权利要求1所述的一种中间体2’-脱氧鸟苷的制备方法，其特征在于：所述生物催化反应底物为脱氧核糖供体与受体的组合，包括2’-脱氧尿苷与鸟嘌呤、2’-脱氧腺苷与鸟嘌呤、2’-脱氧胞苷与鸟嘌呤、β-胸苷与鸟嘌呤。

4.根据权利要求3所述的一种中间体2’-脱氧鸟苷的制备方法，其特征在于：所述生物催化反应底物为β-胸苷与鸟嘌呤。

5.根据权利要求3或4所述的一种中间体2’-脱氧鸟苷的制备方法，其特征在于：生物催化反应体系中糖基供体浓度为50-300mM，糖基受体浓度为50-300mM；生物催化反应体系中温度为25-45℃，pH值3.0-9.0，生物催化时间为2-6h。

6.根据权利要求5所述的一种中间体2’-脱氧鸟苷的制备方法，其特征在于：生物催化反应体系中糖基供体浓度为200mM和糖基受体浓度为250mM。

7.根据权利要求5所述的一种中间体2’-脱氧鸟苷的制备方法，其特征在于：生物催化反应体系中温度为30-35℃，pH值4.0-5.0，生物催化时间为3-4h。