[发明专利]一种乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法

权利要求书

1.一种乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)黑曲霉孢子接种柱状活性碳

使用培养基将黑曲霉ATCC 16888孢子调为浓度1-1.5×10⁸/mL的孢子液，将孢子液均匀喷洒到灭菌后的柱状活性碳上，在30-35℃培养20-24h，得到初步活化的柱状活性碳；

(2)使用发酵设备浅盘罐进行发酵

第一批次发酵：从固体物料加入管接入初步活化的柱状活性碳到浅盘中；开启涡轮泵一，打开进口阀，向第一个浅盘中加入发酵培养基，当浅盘的培养基溢出后，停止向第一个浅盘加入培养基，开始向第二个浅盘加入培养基，依次类推，所有浅盘都加满培养基，当浅盘罐底部发酵培养基液面达到标准线时，开启出口阀，让所有管道内充满发酵培养基，关闭进口阀；涡轮泵二一直开启，让发酵培养基的流速为25-30L/min，同时开启空气进口管A、B、C的阀门，调节空气流量，将空气进口管A通气量调为8-10L/min、空气进口管B通气量调为3-4L/min、空气进口管C通气量调为2-3L/min，发酵1.5-2d；从液体进口管向整个发酵体系加入葡糖糖使其浓度达到2-3g/L，加入活性碳纳米粉末使其浓度达到40-50g/L，将空气进口管A通气量调为6-8L/min、空气进口管B通气量调为2-3L/min、空气进口管C通气量调为0.5-1L/min，发酵2-3d；从液体进口管向整个发酵体系加入葡糖糖使其浓度达到2-3g/L，加入活性碳纳米粉末使其浓度达到40-50g/L，将空气进口管A通气量调为4-5L/min，空气进口管B通气量调为1-1.5L/min，空气进口管C通气量调为0.5-0.6L/min，发酵1-2d，得到成熟的发酵醪液，打开出料口，放出第一批次发酵醪液，活化的柱状活性碳被滤网拦截在浅盘中用于下一批次的发酵；

按照第一批次发酵的操作，进行第二批次、第三批次、第四批次、第五批次发酵。

2.根据权利要求1所述的乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：步骤(1)中，每1.0kg柱状活性碳喷洒150-250mL孢子液。

3.根据权利要求1所述的乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：步骤(2)所述的发酵培养基的配制为：麸皮30g/L，氯化铵5g/L，磷酸二氢钾2g/L，玉米芯粉12g/L，蛋白胨0.01g/L，自然pH，灭菌后过滤，滤液即为发酵培养基。

4.根据权利要求1所述的乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：步骤(2)中发酵的温度为25-30℃。

5.根据权利要求1所述的乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：步骤(2)中所述的发酵设备浅盘罐，包括罐体；所述罐体内部一侧固定安装有多个浅盘，所述罐体内部另一侧与浅盘不接触；所述浅盘靠近罐体另一侧的边缘内部设有滤网；所述罐体底部设有蒸汽进口管、顶部设有蒸汽出口管用于灭菌；所述罐体底部一侧通过软管一依次连接有出口阀、涡轮泵二、出料口；所述软管一的末端连接混合喷射结构，所述混合喷射结构由通过管道连接的混合喷射结构A、B、C组成；所述混合喷射结构A包括喷射腔大膨胀室A、喷射腔小膨胀室A；所述喷射腔大膨胀室A连接有空气进口管A，所述喷射腔大膨胀室A还连接有液体进口管，液体进口管上设有涡轮泵一、进口阀；所述混合喷射结构B包括喷射腔大膨胀室B、喷射腔小膨胀室B，所述喷射腔大膨胀室B上连接有空气进口管B；所述混合喷射结构C包括喷射腔大膨胀室C，喷射腔大膨胀室C上连接有空气进口管C；所述空气进口管A、空气进口管B、空气进口管C均设有空气过滤器、空气流量计和空气流量调节阀；所述混合喷射结构C的出口端通过多根软管二分别穿过罐体与浅盘连通；所述罐体上还设有多根穿过罐体与浅盘连通的固体物料加入管。

6.根据权利要求5所述的乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：所述浅盘在竖直方向上等间距安装。

7.根据权利要求5所述的乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：所述软管一上套有管套，所述管套有设有热水进口、热水出口。

8.根据权利要求5所述的乙醇耐受纤维素内切酶的连续多批次发酵方法，其特征在于：所述罐体内部距离罐底7-10cm为标准线。