[发明专利]一种鉴定烟草低镉突变体杂交后代基因型的引物对及方法有效
| 申请号： | 201711322924.3 | 申请日： | 2017-12-12 |
| 公开（公告）号： | CN107904323B | 公开（公告）日： | 2021-02-09 |
| 发明（设计）人： | 赵海军;任学良;张吉顺;张超;王仁刚;曾吉凡;王自力 | 申请（专利权）人： | 贵州省烟草科学研究院;浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 张行超 |
| 地址： | 550081 贵州*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴定 烟草 突变体 杂交 后代 基因型 引物 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种鉴定烟草低镉突变体杂交后代基因型的检测方法，其特征在于：以被检测烟草的DNA为模板，利用引物对进行扩增，其扩增产物根据HRM曲线可区分纯合突变型、杂合突变型和纯合野生型；纯合野生型基因的序列如Seq ID No.3所示，纯合突变型基因的序列如Seq ID No.4所示；所述引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GAAATAGAGGGTGATAGTTTCA 3’；Seq ID No.2：5’CATTTCAGCGTAATGCAGAATTA 3’。
2.根据权利要求1所述的一种鉴定烟草低镉突变体杂交后代基因型的检测方法，其特征在于：还包含以下步骤：(1) 采用CTAB法提取烟草样品苗期叶片基因组DNA；(2) 以所述基因组DNA为模板，利用上述引物对进行PCR扩增；(3) PCR扩增产物利用HRM检测仪器LightScanner96进行突变位点扫描；(4)根据HRM曲线结果，判断烟草待检样品的基因型；当待测样品的HRM曲线与野生型对照贵烟1号一致时，则为野生型材料；如果HRM荧光曲线峰值ΔF ≥ 0.05，且HRM曲线与纯合基因型突变体对照相一致时，则为纯合突变型；如果出现其他曲线类型，则为杂合突变类型。
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