[发明专利]一种辅助治疗骨质疏松症的金枪鱼鱼骨保健食品及其制备方法

权利要求书

1. 一种辅助治疗骨质疏松症的金枪鱼鱼骨保健食品，其特征在于：所述的金枪鱼鱼骨保健食品由如下重量份的原料制成：金枪鱼鱼骨胶原肽80-95份，金枪鱼鱼骨活性钙5-10份，淫羊藿苷1-3份，维生素D 0.001-0.005份；

所述金枪鱼鱼骨胶原肽的平均分子量为1358.0-1549.0Da，甘氨酸、赖氨酸、组氨酸、精氨酸、蛋氨酸、亮氨酸、缬氨酸含量分别为427.7-435.1残基/1000残基、31.8-32.9残基/1000残基、67.5-69.2残基/1000残基、55.4-56.1残基/1000残基、27.3-28.2残基/1000残基、35.2-36.7残基/1000残基和27.6-28.8残基/1000残基；

所述金枪鱼鱼骨胶原肽具有促进成骨样MG-63细胞增殖的作用；

所述金枪鱼鱼骨胶原肽的制备方法包括：

1）金枪鱼鱼骨的预处理：按照料液比1g:10-15mL向金枪鱼鱼骨中加入0.1mol/L NaOH溶液，于2-4℃下浸泡3-5小时，然后用蒸馏水反复洗涤至pH 6.5-7.0，按照料液比1g:5-10mL加入0.5mol/L、pH为7.4的EDTA溶液，于2-4℃下浸泡24-48小时后干燥、粉碎，得鱼骨粉；

2）金枪鱼鱼骨的酶解：按照料液比1g:15-20mL向鱼骨粉中加入超纯水，加入胰蛋白酶，于温度35-45℃下酶解3-4小时；然后加入中性蛋白酶，酶解3-5小时后，溶液升温至90-95℃并保持10-15分钟后，冷却至室温，10000-11000g离心20-25分钟，取上清液，即为酶解产物；所述胰蛋白酶的添加量为鱼骨粉质量的1.0-1.5%，胰蛋白酶活力为2.5-3.5×10⁴U/g；中性蛋白酶的添加量为鱼骨粉质量的1.0-1.5%，中性蛋白酶活力为1.8-2.5×10⁵U/g；

3）金枪鱼鱼骨胶原肽的制备：将制备的酶解产物采用5kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于5kDa部分，得超滤酶解液，超滤酶解液按照体积比加入到装有10-15倍D101大孔树脂的层析柱中，用2-3倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用5-8倍柱体积的95%乙醇进行洗脱，乙醇洗脱液于45-50℃下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得胶原肽混合物，胶原肽混合物经凝胶柱层析纯化，得到金枪鱼鱼骨胶原肽；

所述金枪鱼鱼骨胶原肽的制备中的凝胶柱层析方法为：将胶原肽混合物溶于双蒸水配成浓度为10-20mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶G-50柱层析分离，用双蒸水进行洗脱，根据214nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，对促进成骨样MG-63细胞增殖作用最强的峰为金枪鱼鱼骨胶原肽。

2.一种如权利要求1所述的辅助治疗骨质疏松症的金枪鱼鱼骨保健食品的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括：

溶解：称取1-3份淫羊藿苷和0.001-0.005份维生素D溶解于50-80份95-97%的乙醇中，搅拌并充分溶解后待用；

制备：取80-95份金枪鱼鱼骨胶原肽和5-10份金枪鱼鱼骨活性钙于200-300份双蒸水中，搅拌混均，再加入上述溶解步骤中的乙醇溶液混匀，喷雾干燥，粉末上胶囊填充机进行充填制成胶囊；

所述胶囊的粒重为0.28-0.30g/粒。

3.根据权利要求2所述的一种辅助治疗骨质疏松症的金枪鱼鱼骨保健食品的制备方法，其特征在于：所述淫羊藿苷的制备方法包括：

提取：淫羊藿粉碎后按照料液比1g:10-15mL加入45-50%乙醇溶液，加热回流提取3.0-5.0小时，利用旋转蒸发仪脱除乙醇，得淫羊藿提取液；

洗脱：按照淫羊藿提取液与D101大孔树脂体积比1:15-20加入到色谱柱内，用双蒸水洗脱2-3个体积后，然后用60%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪脱除乙醇、干燥得淫羊藿苷。