[发明专利]一种面包树果实凝集素的提取方法

说明书

本方案公开了一种面包树果实凝集素的提取方法，包括(1)原料制备：从新鲜的面包树果实中取果实籽，得新鲜原料；(2)打浆：在新鲜原料中加入Tris‑HCl缓冲液，经匀浆机打碎得浆状原料；(3)热水浴浸提：在40～90℃的条件下对浆状原料浸提1～2h，浸提后过滤得滤液；(4)第一次离心：在4000～8000r/min的条件下对滤液离心处理15～30min，然后取上清液；(5)硫酸铵沉淀目的蛋白：在上清液中加入硫酸铵至饱和度为60～100％，静置2～8h得悬浊液；(6)第二次离心：在4000～8000r/min的条件下对悬浊液离心处理15～30min，弃上清液，沉淀用Tris‑HCl缓冲液重悬，得面包树果实凝集素粗品。采用本方案的方法提取面包树果实凝集素，能有效提高面包树果实凝集素的提取率和纯度。

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，特别涉及一种面包树果实凝集素的提取方法。

背景技术

凝集素是一组广泛分布在多种动物、植物、真菌、细菌和病毒等生物的非免疫来源的糖蛋白，包含至少一个非催化结构域，能够特异性地识别和可逆性地结合到特定的游离糖或寡糖上，且在不改变糖分子结构的基础上发挥一系列的生物学效应。植物凝集素主要分布在植物中，以储藏器官和繁殖器官为主。大量研究指出，植物凝集素在对靶细胞的识别和结合，细胞的定位，诱导细胞凋亡与自噬，免疫学的防御功能以及细胞毒性和跨膜信号的转导等方面均发挥着重要的调控作用，特别是其在抗肿瘤和抗病毒方面的应用越来越广泛和成熟。由于植物凝集素来源广泛、特异性高且功能多样，是细胞生物学和免疫学的重要工具。

面包树（Artocarpus incisa (Thunb.) L.）原产于新几内亚，印度尼西亚，菲律宾等热带地区，其果实具有抗炎、抗氧化、抗真菌、抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节作用。面包树果实凝集素（frutalin，FTL）是从面包果籽中分离出的糖蛋白，具有四聚体结构。面包树果实凝集素的氨基酸序列、结构以及糖结合特异性等与Jacalin家族中第一个被发现的半乳糖结合凝集素A. integrifolia seeds—jackfruit的极其相似，经证实属于Jacalin家族。在功能性质方面，面包树果实凝集素与Jacalin也表现出相似性，然而由于面包树果实凝集素拥有高强度的凝血活性，相较于jackfruit，它的生物学活性更显著。研究表明，面包树果实凝集素是一种能够引起免疫调节的植物凝集素，可以作为肿瘤标志物，在生物医学应用中越来越受到人们的关注。

目前，面包树果实凝集素的提取主要是对果实籽进行打浆、离心、浓缩而得，由于提取工艺粗糙，导致面包树果实凝集素的提取率和纯度均较低。

发明内容

本发明意在提供一种面包树果实凝集素的提取方法，以实现较高的面包树果实凝集素提取率和纯度。

本方案中的一种面包树果实凝集素的提取方法，包括以下步骤：

（1）原料制备：从新鲜的面包树果实中取果实籽，得新鲜原料；

（2）打浆：在新鲜原料中加入Tris-HCl缓冲液，经匀浆机打碎得浆状原料；

（3）热水浴浸提：在40～90℃的条件下对浆状原料浸提1～2h，浸提后过滤得滤液；

（4）第一次离心：在4000～8000r/min的条件下对滤液离心处理15～30min，然后取上清液；

（5）硫酸铵沉淀目的蛋白：在上清液中加入硫酸铵至饱和度为60～100％，静置2～8h得悬浊液；

（6）第二次离心：在4000～8000r/min的条件下对悬浊液离心处理15～30min，弃上清液，沉淀用Tris-HCl缓冲液重悬，得面包树果实凝集素粗品。

本方案的工作原理及其有益效果：