[发明专利]一步吸附法制备多肽微胶囊的方法

说明书

本发明涉及一种一步吸附法制备多肽微胶囊的方法，属于生物材料领域。其特点在于：利用多酚掺杂碳酸钙微米颗粒，在温和的条件下吸附多肽，再将吸附在颗粒表面的多肽进行交联，最后去除碳酸钙，得到多肽微胶囊。本发明的优点是制备微胶囊的条件温和，无需进行多次自组装，工艺简单，制备高效，且不易引入杂质。此外，制备的多肽微胶囊具有良好的生物相容性和可生物降解性，有望在体内实现在特定位点对胶囊的降解以及药物的可控释放。因此，在医药载体方面具有潜在的研究与应用前景。

技术领域

本发明属于生物材料领域，具体涉及一种多肽微胶囊的制备方法，特别是指一步吸附法制备多肽微胶囊的方法。

背景技术

层层自组装（LBL）是上世纪90年代快速发展起来的一种简易、多功能的表面修饰方法，最初利用带电基板在带相反电荷的聚电解质溶液中交替沉积制备聚电解质自组装多层膜。随着该技术在制膜方面的发展，组装材料的选择范围变得广泛，可以是聚电解质，也可以是多肽、多糖、DNA等带荷电的生物活性大分子；制备工艺简单，通过简单的交替浸涂技术，可在材料表面上实现纳米、亚微米尺度的有规结构设计；制备条件温和，可在常温水溶液中进行，可以保证生物分子具有维持生物活性的天然构象；此外，该方法适用的基体材料种类多，对基体材料的体型结构适应性强，并可在具有复杂体型结构的装置和材料上实现。

以碳酸钙为模板，利用LBL技术在其表面交替组装聚电解质薄膜，再加入稀酸分解或乙二胺四乙酸（EDTA）络合钙离子，去除CaCO₃胶体粒子制备微胶囊。制备的载体胶囊生物毒性低，可以达到高效包载药物，保护药物疗效的同时，有效实现药物的缓释。此类药物载体由于具有诸多优点而备受各个研究领域的人员关注。

文献[Lomova M V, Brichkina A I, Kiryukhin M V, et al. Multilayercapsules of bovine serum albumin and tannic acid for controlled release byenzymatic degradation [J]. ACS applied materials interfaces, 2015, 7(22):11732-11740]表明，胰蛋白酶可在赖氨酸和精氨酸的羧基处切断肽键，从而胶囊壁含有较多该种氨基酸组成的多肽将被快速降解，导致胶囊也因此破裂。而对于不同类型的蛋白而言，其所含氨基酸的种类和数量均有所不同，很难做到蛋白质组装的药物载体在特定蛋白酶的分解下单一降解。通过设计多肽的序列，利用多肽代替蛋白质制备药物载体，有望实现在体内不同位点，特定的蛋白酶作用载体而致其破裂，从而达到药物的特定区域释放。

然而，层层自组装技术在具体制备多肽微胶囊时，需要根据组装层数进行多次组装和清洗，操作步骤繁琐且耗时，工艺难度较大且损耗较多。目前国内外在温和条件下，对于一步吸附法制备多肽微胶囊的研究还没有报道。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的缺点和不足，而提供一种无需多次自组装、制备效率高的一步吸附法制备多肽微胶囊。

为实现上述目的，本发明的技术方案是一步吸附法制备多肽微胶囊的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）多酚掺杂碳酸钙颗粒的制备：在10～40℃下，将浓度为0.1～1M的钙盐溶液和浓度为2～50mg/mL的多酚溶液混合，搅拌均匀，之后剧烈搅拌或超声摇晃下，快速加入与钙盐溶液等摩尔量的碳酸盐溶液，搅拌或超声摇晃30～60秒，静置10～30分钟，离心,超纯水洗涤，收集多酚掺杂碳酸钙颗粒；

（2）多肽的吸附：将步骤（1）所得颗粒至于离心管中，加入2～10mg/mL的多肽溶液，通过调解缓冲溶液pH为6.2～11.0之间，在4～40℃下孵育0.5～12小时，离心，用该pH缓冲溶液洗涤，得到表面吸附多肽的颗粒；