[发明专利]一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株及其应用

说明书

本发明公开了一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株及其应用，属于细菌基因工程技术领域。本发明的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株为缺失了apxIC基因、apxIIC基因、apxIV‑orf1基因、cpxAR基因、arcA基因以及ureA基因的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌株。该菌株不含抗性标记，其毒力低、在宿主体内易被清除，且具有很好的免疫保护力，是一种优秀的弱毒疫苗，对猪传染性胸膜肺炎的防治具有重要的意义。

技术领域

本发明属于细菌基因工程技术领域，具体涉及一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株及其应用。

背景技术

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是一种革兰氏阴性菌，属于巴氏杆菌科(Pasteurellaceae)放线杆菌属(Actinobacillus)，有荚膜，周身菌毛，部分菌株存在鞭毛，具有运动能力，可形成芽孢。根据APP生长对烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide,NAD，又称V因子)的依赖性，把APP分为生物I型和生物II型两个生物型。生物I型菌株的生长依赖NAD，而生物II型菌株的生长不依赖NAD。根据血清型分类如今可分为16种，各地方流行的血清型有所差异，不同血清型之间的交叉保护不强。我国主要流行血清1、2、3和7型，所有血清型均具有强弱不同的溶血活性与细胞毒性。

猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由APP引起的一种猪传染性呼吸道疾病，给世界养猪业造成了严重的经济损失。自我国发现PCP流行以来，广大兽医工作者对其病原学、流行病学、诊断及防制等方面都进行了一系列研究，取得了一定的成就。但目前该病在我国发病率仍逐年增长，有的猪场阳性率已达到70％以上，已经成为集约化猪场的主要传染病之一，严重危及到我国的养猪业。

抗生素在预防和控制细菌性传染病上曾起到很大作用，但随着耐药菌株的频繁出现以及国家对抗生素使用的严格限制，疫苗在控制猪传染性胸膜肺炎将成为主要的手段，应用新型安全、高效的基因缺失疫苗将成为控制猪传染性胸膜肺炎的一种趋势。

游武进等人在APP血清1型四基因缺失株CH04(△apxIC/△apxIIC/△apxIV-orf1/△cpxAR)的基础上进一步缺失arcA基因获得了APP血清1型五基因缺失株YWJ05(△apxIC/△apxIIC/△apxIV-orf1/△cpxAR/△arcA)，五基因缺失株YWJ05解决了四基因缺失株CH04存在的对肺脏有损伤的问题(游武进，胸膜肺炎放线杆菌五基因缺失疫苗菌株构建及生物学特性分析，华中农业大学硕士学位论文，2013-06-01)。但四基因缺失株CH04、五基因缺失株YWJ05被机体清除方面的效果都不太理想。一种好的疫苗，一方面需要较低的毒力，另一方面要有更好的免疫保护力，并容易被机体所清除。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的缺陷与不足，提供一种更为优秀的弱毒疫苗菌株——不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株。本发明的目的还在于提供所述六基因缺失株的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种不含抗性标记的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型六基因缺失株，为缺失了apxIC基因、apxIIC基因、apxIV-orf1基因、cpxAR基因、arcA基因以及ureA基因的猪胸膜肺炎放线杆菌血清1型菌株WBY06。WBY06菌株是在五基因缺失株YWJ05(游武进，胸膜肺炎放线杆菌五基因缺失疫苗菌株构建及生物学特性分析，华中农业大学硕士学位论文，2013-06-01)的基础上进一步缺失ureA基因获得。