[发明专利]杂交瘤细胞株及其产生的抗体和制备方法

说明书

本发明公开了杂交瘤细胞株及其产生的抗体和制备方法，杂交瘤细胞株1F9‑1F5和杂交瘤细胞株2G3‑1D7，已依次于2017年10月11日和2017年11月06日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号依次为CGMCC No.14725和CGMCC No.14733，所述杂交瘤细胞株的制备方法，包括以下步骤：a)通过原核表达得到Vip3Aa20重组蛋白；b)免疫动物：将Vip3Aa20重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5‑7天进行ELISA检测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存，所述杂交瘤细胞株分泌的单抗为实现抗虫蛋白Vip3Aa20在转基因玉米MIR162中的定性、定量检测奠定基础。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，具体涉及到杂交瘤细胞株及其产生的抗体和 制备方法。

背景技术

苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis，Bt)是一种广泛存在于土壤中的革兰 氏阳性菌，在营养生长期分泌具有高抗虫活性的可溶蛋白(Vegetative InsecticidalProteins,Vip proteins)。在接种15个小时至产孢期，菌液上清均 可检测到Vip3蛋白的表达。抗虫蛋白Vip3对鳞翅类(Lepidoptera)昆虫有广 泛毒性，当昆虫取食Vip3蛋白后，该蛋白经中肠蛋白酶活化，活化的蛋白穿 透围食膜，与中肠细胞的上皮细胞顶膜特异蛋白结合并形成肠穿孔，从而破 坏细胞的渗透平衡，引起细胞肿胀裂解，最终导致死亡。因此Vip3基因已成 为植物基因工程及转基因育种应用中最具有潜力和应用前景的抗虫基因。其 中Vip3Aa基因已成功的被用于转基因棉花和玉米。

转基因作物的飞速发展在带来巨大经济利益的同时，人们也越来越关注 转基因作物可能带来的不可预期的食用安全及环境安全性问题，越来越多的 国家要求对转基因产品进行检测以实行标识制度。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理 解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术 人员所公知的现有技术。

发明内容

本发明的目的在于提供杂交瘤细胞株及其产生的抗体和制备方法，其分 泌的单抗为实现抗虫蛋白Vip3Aa20在转基因玉米MIR162中的定性、定量检 测奠定基础。

为实现上述目的，本发明提供了一种杂交瘤细胞株的制备方法，包括以 下步骤：

a)通过原核表达得到Vip3Aa20重组蛋白；

b)免疫动物：将Vip3Aa20重组蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠；

c)细胞融合：收集免疫BALB/c小鼠的脾细胞并与SP2/0细胞进行融合；

d)细胞建株：通过有限稀释法进行亚克隆，亚克隆5-7天进行ELISA检 测，直至筛选出稳定分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株进行扩大再培养和保存。

上述制备方法在另一种实施方式中，小鼠的脾细胞与SP2/0细胞的融合比 例为1:5-1:10。

本发明还提供了上述制备方法所制备出的杂交瘤细胞株，包括生物保藏 编号为CGMCC No.14725的杂交瘤细胞株1F9-1F5以及生物保藏编号为 CGMCC No.14733的杂交瘤细胞株2G3-1D7。

本发明还提供了上述杂交瘤细胞株所产生的单克隆抗体，所述杂交瘤细 胞株1F9-1F5的生物保藏编号为CGMCC No.14725，所述杂交瘤细胞株 2G3-1D7的生物保藏编号为CGMCC No.14733。

上述单克隆抗体在另一种实施方式中，杂交瘤细胞株1F9-1F5以及杂交 瘤细胞株2G3-1D7所产生的单克隆抗体的类型依次为IgG1和IgG2a。