[发明专利]一种烟草外植体防褐化方法在审
申请号: | 201711331433.5 | 申请日: | 2017-12-13 |
公开(公告)号: | CN107950396A | 公开(公告)日: | 2018-04-24 |
发明(设计)人: | 曾婉俐;张建铎;邓乐乐;张涛;高茜;许力;宋春满;蒋佳芮;向海英;陈章玉;李雪梅;夏庆友;贾凌;高军平 | 申请(专利权)人: | 云南中烟工业有限责任公司 |
主分类号: | A01H4/00 | 分类号: | A01H4/00 |
代理公司: | 昆明正原专利商标代理有限公司53100 | 代理人: | 金耀生,亢能 |
地址: | 650231 *** | 国省代码: | 云南;53 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 烟草 外植体防褐化 方法 | ||
1.一种烟草外植体防褐化方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤(1),种子的消毒;
步骤(2),种子培养:将步骤(1)得到的种子接种到MS培养基中,在培养温度为25±1℃,光照强度30-50μmol/(m2·s),光照时间为16h/d的条件下培养60d,种子发芽长成外植体幼苗;
步骤(3),烟草外植体组织培养:将步骤(2)中得到的外植体幼苗置于MS分化培养基中,控制白天温度为28℃,夜间温度为25℃,光照强度为30-50μmol/(m2·s),光照时间为16小时/天,培养时间为7天,得到外植体愈伤组织。
步骤(4),外植体防褐化培养:将步骤(3)中得到的外植体愈伤组织置于MS防褐化培养基中,控制白天温度为28℃,夜间温度为25℃,光照强度为30-50μmol/(m2·s),光照时间为16小时/天,培养时间为40天,MS防褐化培养基为MS基本培养基中加入0.5-1g/L硫代硫酸钠、0.2-0.5g/L聚乙烯基吡咯烷酮、5-10mg/L二硫苏糖醇、30g/L蔗糖、5g/L花生饼粉、3g/L豆饼粉和4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.7。
2.根据权利要求1所述的烟草外植体防褐化方法,其特征在于:步骤(1)中,取饱满的烟草种子,然后移至超净工作台上,用75%酒精将种子浸泡30s,无菌水冲洗2遍,再用1%AgNO3消毒10min,无菌水浸泡清洗5次,用无菌滤纸吸干种子表面水分后进行接种,其中无菌水为经高压灭菌的超纯水。
3.根据权利要求1所述的烟草外植体防褐化方法,其特征在于:步骤(2)中,所述MS培养基为MS基本培养基中添加30g/L蔗糖和4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.7。
4.根据权利要求1所述的烟草外植体防褐化方法,其特征在于:步骤(3)中,所述外植体MS分化培养基为MS基本培养基中添加0.5mg/L的萘乙酸NAA、2mg/L的6-苄基腺嘌呤6-BA、30g/L蔗糖,4g/L的琼脂,培养基的pH值为5.7。
5.根据权利要求1所述的烟草外植体防褐化方法,其特征在于:步骤(5)中,MS防褐化培养基的制备方法如下:
A、配制1L MS防褐化培养基:将4.43g MS基本培养基、30g蔗糖、5g花生饼粉、3g豆饼粉、1L超纯水混合,并调节培养基的pH值为5.7;
B、添加0.5-1g/L硫代硫酸钠、0.2-0.5g/L聚乙烯基吡咯烷酮、5-10mg/L二硫苏糖醇和4g琼脂,121℃灭菌15min;
C、灭菌后倒培养基。
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