[发明专利]一种同步化培养微藻的方法有效
申请号: | 201711334097.X | 申请日: | 2017-12-14 |
公开(公告)号: | CN109957510B | 公开(公告)日: | 2023-07-28 |
发明(设计)人: | 杨欢;张京奎;刘士涛;邹志刚;吴聪萍;刘建国 | 申请(专利权)人: | 南京大学昆山创新研究院 |
主分类号: | C12N1/12 | 分类号: | C12N1/12;C12R1/89 |
代理公司: | 广州华智创益知识产权代理有限公司 44568 | 代理人: | 陈佳良 |
地址: | 215300 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 同步 培养 方法 | ||
1.一种同步化培养小球藻的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将小球藻以10%接种量接种于含有葡萄糖的培养基中,培养温度为30℃,初始转速200rpm,100μmol/m2/s的光照条件下培养2天;
(2)将步骤(1)获得的小球藻的培养温度迅速降至4℃的诱导温度进行低温诱导培养1个月,在步骤(2)开始之前,在培养基中补加保护剂,以避免低温处理对细胞的损伤;
(3)将步骤(2)获得的小球藻的培养温度重新升至30℃,继续培养3天,以获得基本处于同步化生长的细胞;
(4)将步骤(3)获得的细胞利用分批培养方式培养,按10%的接种量接种于生物反应器中,装液系数0.70,培养温度30℃,气液比1.0 vvm,初始转速200rpm;
(5)当步骤(4)获得的细胞密度达到100g/L时,流加补料培养基;
(6)流加培养10-48小时后停止补料,使细胞饥饿2-8小时,调控细胞代谢处于饥饿状态,溶氧迅速上升,将溶氧开始上升时记为饥饿开始时间,恢复补料后,溶氧迅速下降,将溶氧开始下降时记为饥饿结束时间,调控细胞代谢恢复至营养代谢状态;
(7)重复步骤(6)若干次,直至细胞密度达到预期值,所述预期值为100g/L;
(8)当步骤(7)中的细胞密度达到预期值时,更换补料培养基,使培养基中糖处于匮乏状态,促使细胞内蛋白质大幅积累,培养96小时,细胞干达到108g/L,蛋白质含量达到55%。
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