[发明专利]一种骨髓染色体G带的制作方法

说明书

本发明公开了一种骨髓染色体G带的制作方法，包括以下步骤：(1)进行骨髓白细胞计数，根据白细胞计数结果确定骨髓血的接种量和培养时间；(2)将骨髓血接种到骨髓细胞培养基中进行培养；(3)向骨髓细胞培养基中加入秋水仙素，终止培养；(4)收取骨髓细胞培养物，将其配制成细胞悬液，调节细胞悬液的浊度为2‑3个麦氏浊度；(5)将细胞悬液滴于玻片上，然后将玻片过火，过火时间为10‑15s，过火后再进行烘烤；(6)将烘烤后的玻片采用胰蛋白酶进行处理，然后采用姬姆萨染料染色，即获得具有G显带的染色体标本。采用本发明的方法制作的骨髓染色体呈长棒状，分散良好无交叉，显带清晰。

技术领域

本发明涉及生物医学检验技术领域，具体涉及一种骨髓染色体G带的制作方法。

背景技术

随着分子生物学与细胞遗传学的发展，骨髓染色图核型分析在血液系统疾病的诊断、治疗和预后中发挥了越来越重要的作用。在对染色体的研究过程中，研究者们期望通过实验技术导致染色体内部结构的分化染色，以获得更多的具有鉴别特征的信息，即所谓染色体的“解剖学”特征。通过采用不同的方法以及不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出现明暗相间或深浅不同的带纹，这种分化染色技术即为染色体显带技术。G带是目前被广泛应用的一种带型，它主要是被姬姆萨(Giemsa)染料染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个中期细胞的染色体上。

骨髓染色体的制作主要包括：细胞收获、低渗、固定、制片和染色等步骤，每个步骤都可能会影响骨髓染色体的制备成功。由于骨髓染色体的制作过程复杂，影响因素众多，常常出现可分析分裂象小，染色体粗短，且分散不良等现象，大大降低了染色体核型分析的成功率，降低了其临床实用性。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明的目的是提供一种骨髓染色体G带的制作方法。采用本发明的方法制作的骨髓染色体呈长棒状，分散良好无交叉，显带清晰。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种骨髓染色体G带的制作方法，包括以下步骤：

(1)进行骨髓白细胞计数，根据白细胞计数结果确定骨髓血的接种量和培养时间；

(2)将骨髓血接种到骨髓细胞培养基中进行培养；

(3)向骨髓细胞培养基中加入秋水仙素，终止培养；

(4)收取骨髓细胞培养物，将其配制成细胞悬液，调节细胞悬液的浊度为2-3个麦氏浊度；

(5)将细胞悬液滴于玻片上，然后将玻片过火，过火时间为10-15s，过火后再进行烘烤；

(6)将烘烤后的玻片采用胰蛋白酶进行处理，然后采用姬姆萨染料染色，即获得具有G显带的染色体标本。

优选的，步骤(1)中，骨髓白细胞的计数方法为：用白细胞稀释液先破坏红细胞，然后用血细胞计数板进行计数四角大方格，得出平均数N。

优选的，步骤(1)中，骨髓血接种量的确定方法为：

当N≤20，每5ml骨髓细胞培养基内骨髓血的接种量为2.5ml；

当20＜N≤200，每5ml骨髓细胞培养基内骨髓血的接种量为50/N ml；

当N＞200，将骨髓血稀释至N’＝80-120，再按每5ml骨髓细胞培养基内骨髓血的接种量为50/N’ml进行接种。

优选的，步骤(1)中，培养时间的确定方法为：

当N≤40时，培养3天；

当N＞40时，培养2天。

优选的，步骤(2)中，所述骨髓细胞培养基为RPMI-1640培养基。